Desenvolvimento de embriões in vitro na presença de IGF-1, GH e insulina nos meios de maturação de ovócitos e cultivo embrionário - Ponchirolli, Carla Bianchini [UNESP] (2006)
As técnicas de produção in vitro de embriões bovinos ainda precisam ser melhoradas em relação às taxas de embriões produzidos e sua qualidade. A adição de fatores de crescimento aos meios de cultivo de embriões bovinos tem sido estudada, com o intuito de melhorar a produção e a qualidade embrionária. O objetivo deste experimento foi testar a adição de GH, IGF-1 e Insulina em duas etapas do processo de produção in vitro: na maturação dos ovócitos e no cultivo dos embriões, visando aumentar as taxas de produção de blastocistos e a qualidade dos embriões produzidos, além de verificar a viabilidade de uma coloração com acridina orange e iodeto de propídeo para avaliação da qualidade dos embriões. No experimento 1, avaliou-se as taxas de clivagem e formação de blastocistos após maturação ovocitária em meio 199 (sais de Earle e L-glutamina e 2,2 mg/ml de bicarbonato de sódio, médium 199, Sigma, Saint Louis, EUA, # M-4530 ), na presença de 10% de SFB, de sódio, 1 mg/ml de 17 estradiol (E2 - Sigma, Saint Louis, EUA, # E-2758), 50 g/ml de hCG (Profasi® 5.000UI), 5 g/ml de FSH (Folltropin-V®, Vetrepharm, Ontário, Canadá), e 75æg/ml de sulfato de gentamicina, suplementado com IGF-1 , GH, Insulina, adicionados separadamente ou em conjunto. No experimento 2 foram avaliadas as taxas de clivagem e formação de blastocistos em meio composto por HTF (Human Tubal Fluid, HTF , Irvane) e BME (Basal Medium Eagle, BME , Sigma, Saint Louis, EUA), na proporção de 1:1 (HTF:BME) acrescido de 0,6% de BSA, 0,01% de Mioinositol e 75 g/ml de gentamicina, incubados em estufa a 38, 5oC, a 5% de CO2 e umidade absoluta, com suplementação de 10% de SFB no dia 3 de cultivo. O meio foi suplementado com IGF-1, GH, Insulina,adicionados separadamente ou em conjunto. No experimento 3, a coloração com acridina orange e iodeto de propídeo foi testada para avaliar a qualidade das estruturas produzidas.