Desenvolvimento embrionário e efeitos da criopreservação após a suplementação deCNP no cultivo in vitro de embriões bovinos - Giovannetti, Camila Bortoliero Costa [UNESP] (2023)
A produção in vitro de embriões bovinos avança tecnologicamente a cada ano. No entanto, a criopreservação desses embriões não é condizente com as melhorias gerais da técnica. Um dos principais fatores relacionados com as baixas taxas de sobrevivência pós-criopreservação é o conteúdo e o perfil lipídico diferentes nos embriões produzidos in vitro (PIV). Estes estão presentes em forma de gotículas lipídicas no citoplasma e na membrana celular dos embriões. Dessa forma, algumas tentativas de adição e remoção de moléculas, no meio de cultivo in vitro (CIV), já foram testadas com o objetivo de reduzir ou alterar o conteúdo lipídico, o que resultou em melhorias após o aquecimento dos embriões submetidos à criopreservação. Embora a utilização do peptídeo natriurético do tipo-C (CNP) – um modulador das concentrações de AMPc e GMPc intracelular – já tenha sido descrita na maturação ou na pré-maturação in vitro, o seu uso na modulação do perfil lipídico das células embrionárias no CIV de embriões bovinos ainda é incipiente. Desta forma, os objetivos gerais desta tese foram: Capitulo 1- detectar a presença do receptor do peptídeo natriurético NPR2 em embriões pré-implantação, encontrar uma concentração não embriotóxica para o cultivo do embrião bovino e avaliar possíveis modulações que o cultivo com CNP pode causar no desenvolvimento embrionário; e Capítulo 2- avaliar se a adição do CNP no cultivo in vitro de embriões bovinos altera sua criotolerabilidade através da modulação do teor e perfil lipídico, assim como com a modulação de transcritos vinculados ao metabolismo embrionário. Foi detectado e quantificado o receptor NPR2 (pela primeira vez e até onde tenhamos conhecimento) em estágios pré-implantação do embrião bovino produzido in vitro. Além disso, foi determinado que o uso de CNP em concentração superior, àquela descrita na literatura, pode alterar o metabolismo embrionário com base na abundância de transcritos e na análise do perfil lipídico. Entretanto, não houve modificação no teor lipídico de embriões bovinos cultivados com CNP. Ainda, foi observada uma manutenção nas taxas de produção após a vitrificação dos embriões cultivados com CNP. Provas funcionais in vivo poderão comprovar, ou não, se essas alterações são traduzidas em uma melhor performance reprodutiva por parte desses embriões tratados com o CNP no CIV.