Análise comparativa dos métodos de quantificação das formas morfológicas de Candida albicans em culturas planctônicas e biofilmes - Soares, Amanda Brandão [UNESP] (2021)
Candida albicans é o principal fungo patógeno que acomete os seres humanos e que apresenta a capacidade de se desenvolver em diferentes morfologias (leveduras, pseudo-hifas e hifas), característica essa denominada de polimorfismo. Esse polimorfismo compromete os métodos de quantificação que requerem precisão e acurácia, como as pesquisas que envolvem fungos filamentosos. O objetivo deste estudo foi comparar os métodos de quantificação de C. albicans por unidades formadoras de colônias (UFC/mL) e por atividade metabólica (Ensaio XTT) com a contagem de células viáveis e de núcleos celulares em Microscópio Confocal. Cepa padrão SC5314 e isolado clínico de C. albicans foram utilizados. Culturas planctônicas padronizadas de cada cepa de C. albicans foram desenvolvidas nas formas de levedura e de filamentos e submetidas a três métodos de quantificação: UFC/mL e contagem celular. Para contagem celular, o Microscópio Confocal foi utilizado com a suspensão fúngica tratada com diferentes marcadores fluorescentes para evidenciar células viáveis, células não viáveis e os núcleos celulares. Biofilmes também foram cultivados em orifícios de placas de 48 poços por 48 horas e foram submetidos aos mesmos testes mencionados para as culturas planctônicas, além do ensaio de XTT. Os dados foram submetidos a uma análise de concordância (Coeficiente de Correlação Intraclasse e Bland-Altman) e de correlação de Spearman (α = 5%) entre os métodos (UFC/mL, contagem celular e XTT). Os resultados demonstraram que não houve concordância (ρ ≤ 0,428) entre o método de UFC/mL e contagem de células para as morfologias de leveduras e filamentos da cepa padrão SC5314 e do isolado clínico de C. albicans, apesar dos métodos terem apresentado alta (rS ≥ 0,884) e significativa (p < 0,001) correlação. Também foi vericado um viés de proporção (p < 0,001) entre esses métodos. Biofilmes de ambas as cepas também apresentaram ausência de concordância (ρ ≤ 0,566) e correlação forte (rS ≥ 0,852) e significativa (p ≤ 0,001) entre os métodos de UFC/mL e células/mL, além de viés de proporção (p < 0,001). Na análise do XTT foi possível visualizar ausência de concordância (p < 0,001), apesar de uma forte e significativa correlação entre os métodos de quantificações (UFC/mL e células/mL). Para todas as morfologias e condições de cultivo, a quantificação por UFC/mL foi menor do que a quantificação por células/mL, sendo então o primeiro um método que subestima a quantificação celular of C. albicans.