Análise do potencial antifúngico e antibiofilme de peptídeos antimicrobianos frente ao Histoplasma capsulatum e análise toxicológica de um derivado de mastoparano - Carvalho, Angélica Romão [UNESP] (2023)
A histoplasmose é uma doença que afeta gravemente populações imunossuprimidas, cujo tratamento apresenta opções farmacológicas limitadas com efeitos adversos consideráveis. O seu agente etiológico, Histoplasma capsulatum, distribui-se globalmente e de forma endêmica pelo território brasileiro. Ademais este fungo possui a habilidade de formar biofilmes, estruturas que intensificam a gravidade das infecções causadas por ele. No presente trabalho, cinco peptídeos antimicrobianos foram testados frente ao fungo. Três derivados de mastoparano e dois derivados de moricin C3 foram testados contra as formas planctônica e de biofilme das cepas G186A e EH-315 de H. capsulatum. O peptídeo MK58911, apresentou a melhor performance, causando a inibição da biomassa dos biofilmes em ambas as cepas de H. capsulatum. Observou-se 33,8% de inibição com 31,2 μg/mL para a cepa G186A e 32,9% com 125 μg/mL para a cepa EH-315. Quanto a viabilidade metabólica nenhum dos peptídeos testados, incluindo o MK58911, foi capaz de afetá-la em nenhuma das formas fúngicas. A análise da atividade sinérgica entre o MK58911 e o itraconazol frente ao biofilme revelou a existência de atividade aditiva entre as moléculas, com valores de ICIF de 0,53 para a cepa G186A e 0,62 para a cepa EH-315. A toxicidade do MK58911 foi analisada em diversos modelos. Para a linhagem celular A549, foram determinados os valores de IC50 de 292 μg/mL para a monocamada e 500 μg/mL para os esferóides. Em modelo alternativo Tenebrio molitor não foi observada toxicidade em nenhuma das doses analisadas (10, 50 e 100 mg/Kg). No entanto, o mesmo peptídeo mostrou-se embriotóxico e teratogênico em modelo Danio rerio, para o qual encontrou-se um valor de LC50 de 6,9 μg/mL. Ademais observou-se diminuição na movimentação espontânea (em 15,6 e 7,8 μg/mL) e na frequência cardíaca (em 15,6; 7,8 e 3,9 μg/mL) dos embriões. Finalmente, realizou-se a cromatografia de afinidade com extrato proteico total de H. capsulatum em coluna acoplada com o peptídeo MK58911. Nas alíquotas eluidas analisadas por SDS-PAGE, observou-se duas bandas diferenciais possivelmente relacionadas a interação entre proteínas do extrato e o peptídeo MK58911, podendo ser estas, indicativos para a explicação dos mecanismos exercidos por este peptídeo.