Peptídeos antimicrobianos e doença periodontal: influência do tabagismo na expressão de peptídeos antimicrobianos e possíveis efeitos de peptídeos sintéticos sobre biofilmes multi-espécies - Soldati, Kahena Rodrigues [UNESP] (2020)
Peptídeos antimicrobianos (PAMs) são importantes componentes da resposta do hospedeiro contra patógenos invasores. Além da ação antimicrobiana direta, podem também participar na modulação do sistema imune. No entanto, o papel dos PAMs na etiopatogênese da doença periodontal e os fatores de risco que podem influenciar sua expressão na cavidade bucal ainda não se encontram totalmente elucidados. Dessa forma, os objetivos do presente estudo foram: (1) avaliar a influência do tabagismo nos níveis de LL-37 e HNP 1-3 no fluido crevicular gengival (FCG) de pacientes com periodontite e investigar a associação entre os níveis destes PAMs e de mediadores inflamatórios nos sítios com ausência e presença de doença periodontal; (2) investigar o impacto do tabagismo nos níveis de hBD1 e 2 em pacientes com periodontite e avaliar os efeitos da nicotina e cotinina na expressão destes PAMs por queratinócitos; (3) avaliar a atividade metabólica e enzimática durante a recolonização de biofilmes multi-espécies periodontopatogênicos após tratamento com peptídeos sintéticos derivados da catelicidina humana (LL31 e D-LL31). A quantificação dos PAMs e mediadores inflamatórios no FCG foi realizada por meio de ensaio ELISA sanduiche e Multiplex, repectivamente, enquanto a RT-qPCR em tempo real detectou a expressão gênica dos PAMs por queratinócitos. A produção de ácido láctico foi mensurada para determinar a atividade metabólica nos biofilmes pós-tratamento, enquanto a atividade enzimática foi analisada por meio da dipeptidil peptidase (DPP). Além disso, a viabilidade celular foi avaliada pela contagem de unidades formadoras de colônia e o qPCR identificou a presença de P. gingivalis e a concentração de bactérias totais nos biofilmes. Os resultados dos estudos clínicos demonstraram que o tabagismo pode influenciar na expressão dos PAMs, reduzindo os níveis de LL-37, HNP 1-3 e hBD1 e aumentando os níveis de hBD2 no FCG. Nos sítios doentes, foram observados maiores níveis de LL-37 comparados aos sítios sadios, com associação positiva à presença de IL-1 e MMP-8. A HNP 1-3, por sua vez, apresentou níveis mais baixos, com associação positiva a IL-10. Nos experimentos in vitro, foi constatado que a nicotina reduz significativamente a expressão gênica de hBD1 por queratinócitos, sendo essa redução mais acentuada na presença de A. actinomycetemcomitans. Tanto a nicotina como a cotinina promoveram redução na expressão de hBD2 quando associadas à cultura bacteriana. No entanto, esta redução foi significativa apenas para o estímulo simultâneo com cotinina e P. gingivalis. Em relação ao efeito dos peptídeos sintéticos sobre a recolonização de biofilmes multi-espécies, os resultados indicam que o D-LL31 possui ação inibitória sobre a atividade metabólica e enzimática durante a recolonização de biofilme multi-espécies periodontopatogênico, podendo seu efeito se prolongar até 5 dias após o tratamento. Assim, podemos concluir que o efeito do tabagismo na expressão dos PAMs pode ser mais um mecanismo associado à maior prevalência e severidade de doença periodontal em fumantes. Além disso, o efeito inibitório do peptídeo sintético D-LL31 torna-o um possível agente terapêutico para utilização no tratamento da doença periodontal.