Avaliação do efeito sinérgico entre o peptídeo 0WHistatina-5 e antifúngicos comerciais na inibição do crescimento de Candida albicans - Fonseca, Fauller Henrique da [UNESP] (2020)
Candida albicans é uma espécie que geralmente se apresenta como um fungo comensal presente na microbiota humana, que pode se desenvolver como patógeno oportunista e causar infecções, principalmente em pacientes imunodeprimidos. Frente ao surgimento de resistência a antifúngicos a busca por novas alternativas terapêuticas se torna necessária. Nesse contexto, os peptídeos antimicrobianos, como a Histatina-5 presente na saliva, se mostram como potenciais candidatos para o combate de infecções fúngicas. Além disso, as terapias combinatórias se demonstram uma opção valiosa no tratamento dessas infecções, principalmente daquelas causadas por cepas resistentes. O objetivo desse trabalho foi avaliar a ocorrência de sinergismo pela combinação do peptídeo 0WHistatina-5 (0WHst5) e os fármacos fluconazol (Flu) e nistatina (Nys) na inibição do crescimento de C. albicans. O peptídeo foi obtido pela síntese de peptídeos em fase sólida, purificado por cromatografia líquida de alta eficiência e caracterizado por espectrometria de massas. A concentração inibitória mínima (CIM) do peptídeo e dos fármacos para as cepas C. albicans ATCC 90028, C. albicans ATCC 18804 e C. albicans ATCC 10231 foi determinada pelo método da microdiluição em caldo. O ensaio checkerboard foi utilizado para avaliar a inibição do crescimento de C. albicans ATCC 90028 pela combinação de diferentes concentrações de 0WHst5 e dos fármacos. Por fim, realizou-se o ensaio time-kill, a fim de observar o perfil temporal de ação das combinações e determinar qual combinação possuía maior potencial terapêutico. O processo de síntese e purificação foi bem-sucedido e a espectrometria de massas confirmou a identidade do peptídeo. A CIM do peptídeo foi de 80 μmol L-1 para as três cepas testadas; para Nys, a CIM foi 2,2 μmol L-1 para C. albicans ATCC 18804 e 4,3 μmol L-1 para as demais; para Flu, a CIM foi 13 μmol L-1 para a cepa C. albicans ATCC 90028 e >400 μmol L-1 para as demais. Os dados do ensaio checkerboard foram analisados na plataforma SynergyFinder e foi observado um valor indicativo de sinergismo para a combinação 0WHst5/Flu por todos os modelos aplicados, enquanto para a combinação 0WHst5/Nys se obteve um valor indicativo de aditividade ou antagonismo a depender do modelo aplicado. O ensaio time-kill permitiu a visualização dos efeitos de inibição de algumas das combinações e principalmente uma comparação com a ação individual do peptídeo e dos fármacos. Para as três cepas testadas observou-se uma diferença bastante significativa entre a ação individual do Flu e a ação da combinação 0WHst5/Flu, tanto ao final, quanto ao longo do ensaio. Para a combinação com Nys também observou-se melhores perfis temporais para a associação, porém as mudanças em relação ao perfil individual foram menos acentuadas, o que já era esperado pelos resultados obtidos no ensaio checkerboard. Desta forma, este trabalho mostrou que a associação do peptídeo 0WHistatina-5 a fármacos convencionais pode representar uma alternativa para o combate e inibição de infecções causada por C. albicans.