Análise da indução tumoral e sítios off-target após administração de lipossomas como vetores do sistema CRISPR/Cas9 em camundongos neonatos - Barros, Vinícius Monteagudo de (2025)
A edição gênica em locais específicos tem se destacado como uma abordagem terapêutica promissora, embora ainda enfrente desafios como resposta imune, efeitos off-target e eficiência na entrega celular. A utilização de lipossomas catiônicos (LC) como vetores não virais oferece vantagens, como proteção do DNA contra manipulação enzimática e evasão do sistema imunológico. Este estudo avaliou se a administração hidrodinâmica intravenosa do complexo CRISPR/Cas9 associada a LC em camundongos neonatos gera eventos off-target e induz formação tumoral. A formulação foi obtida por formação de filme e microfluidização, incorporando plasmídeos do sistema CRISPR/Cas9 e do gene IDUA, relacionado à Mucopolissacaridose tipo I (MPS I). Os complexos encontrados diâmetro médio de 133 nm, IPD de 0,12 e potencial zeta de +43 mV. A biodistribuição inicial demonstrou acúmulo no fígado e na transmissão. Foram utilizados 30 camundongos C57BL/6, divididos em grupo tratado (n=15) e controle (n=15). Após 21 meses, avaliou-se a ocorrência de tumores e fez-se análise molecular por PCR, direcionada ao locus on-target (cromossomo 6) e aos quatro possíveis off-targets (cromossomo 2, 5, 11 e 17), definidos via COSMID. Os amplicons foram sequenciados (Sanger) e analisados pela ferramenta ICE. Não houve aumento na frequência tumoral (20% tratado vs. 33% controle) nem foram detectados eventos fora do alvo. A clivagem on-target foi de 3%, alinhando-se aos dados da literatura. Os resultados indicam que o sistema CRISPR/Cas9 veiculado por LC apresenta perfil seguro nas condições avaliadas, fortalecendo seu potencial para futuras aplicações clínicas.