Caracterização de proteínas mediadoras da sinalização de cálcio no patógeno Cryptococcus neoformans - Squizani, Eamim Daidrê (2020)
Cryptoccocus neoformans é um fungo patogênico e oportunista que acomete principalmente pacientes imunocomprometidos, responsável por quadros de pneumonia e meningite. Para tanto, as células fúngicas devem se adaptar ao ambiente do hospedeiro pela expressão de diversos determinantes de virulência. A regulação desses determinantes pode ocorrer por intermédio de sinais de cálcio (Ca2+), o qual é capaz de ativar a via de sinalização mediada por calcineurina, necessária para a patogênese C. neoformans. Ainda, a manutenção da homeostase intracelular de Ca2+ nesse patógeno é imprescindível para os mecanismos de virulência, sendo regulada por transportadores de Ca2+ , como Pmc1 e Vcx1. Na presente Tese, exploramos o papel de outras proteínas componentes da sinalização e da manutenção da homeostase de Ca2+ em C. neoformans. A caracterização da atividade da proteína ortóloga Ncs1 (neuronal calcium sensor) revelou a influência de uma proteína ligadora de Ca2+ na adaptação de C. neoformans ao hospedeiro. Nossos dados demonstraram que Ncs1 é necessário para a tolerância e regulação da homeostase de Ca2+, sendo a expressão de NCS1 positivamente regulada pela via da calcineurina. Ncs1 é essencial para o aparecimento do broto, divisão celular adequada, e correta expressão gênica de reguladores da progressão de ciclo celular. Ncs1 é indispensável para o desenvolvimento de C. neoformans em condições fisiológicas e para o estabelecimento da criptococose em um modelo de infecção in vivo. A proteína Ncs1 é sensora e responsiva a Ca2+ e, conjuntamente com a via da calcineurina, regula a adaptação ao hospedeiro e virulência de C. neoformans. Além disso, buscamos caracterizar fatores de transcrição que sejam responsivos a sinais de Ca2+. Para tanto, investigamos uma biblioteca de mutantes nulos para fatores de transcrição de C. neoformans, a fim de identificar aqueles com alterações nos níveis intracelulares de Ca2+. A partir disso, duas proteínas foram selecionadas: Sre1 e Hob1, os quais são reguladores da síntese de ergosterol. Reforçando a relação entre estes fatores de transcrição e a sinalização mediada por Ca2+ , identificamos que a disponibilidade de Ca2+ é capaz de diminuir a sensibilidade de C. neoformans a antifúngicos azólicos. Adicionalmente, demonstramos que Ca2+ modula a síntese de ergosterol a nível transcricional.