O silenciamento da ecto-5'-nucleotidase/CD73 altera a progressão de gliomas - Campesato, Luis Felipe Ingrassia (2010)
O glioblastoma multiforme (GBM) é um tipo de tumor bastante agressivo, que apresenta uma elevada taxa de proliferação e um comportamento altamente invasivo. A ecto-5’-nucleotidase (e5NT/CD73) é uma enzima expressa de forma bastante ampla, a qual age na hidrólise do AMP extracelular, com consequente formação de adenosina, molécula com diversas funções celulares. Além da função enzimática, foi mostrado que a e5NT/CD73 também exerce importante papel na interação célula-célula e célula-matriz. Muitas evidências apontam para funções de promoção tumoral desempenhados pela e5NT/CD73, a qual se apresenta expressa em altos níveis em diferentes tumores. No presente estudo caracterizamos o papel desempenhado pela e5NT/CD73 no crescimento de GBM in vitro e in vivo através do silenciamento de sua expressão e atividade em células de glioma de rato C6. A e5NT/CD73 foi silenciada por RNA de interferência estável através de lentivírus e o silenciamento foi caracterizado por métodos de imunofluorescência e atividade enzimática. Além disso, investigamos parâmetros de malignidade in vitro, como adesão e migração celular. Para uma melhor análise do papel da proteína no crescimento tumoral, implantamos as células C6 silenciadas em um modelo de glioma em ratos. Análises patológicas e imunohistoquímicas usando o marcador nestina foram realizados. Foram obtidos dois clones silenciados de forma estável, C6-c54 e C6-c56, os quais tiveram uma significativa redução na expressão e atividade da e5NT/CD73. Foi observada uma significativa alteração no parâmetro de adesão in vitro de ambos clones silenciados, e esse efeito deve-se provavelmente à função de adesão exercida pela proteína e não da sua atividade enzimática, uma vez que o uso do inibidor APCP não foi capaz de diminuir a capacidade de adesão das células wt. Além disso, o implante das células silenciadas não foi capaz de gerar uma massa tumoral in vivo, o que foi confirmado posteriormente por análise imunohistoquímica. Não obstante, todos tumores C6 wt cresceram com todas características histopatológicas de GBM. O crescimento dos tumores C6 não foi bloqueado pela co-injeção com o inibidor enzimático APCP. Desse modo, nossos resultados corroboram outros dados da literatura que indicam um papel crucial da sinalização purinérgica na progressão de GBM. Estudos complementares são necessários para o estabelecimento de novas e mais eficazes terapias contra esses tumores, utilizando a e5NT/CD73 como alvo.