Diagnóstico molecular do vírus de hepatite C e de hepatite B em amostras fixadas em papel filtro - Costenaro, Jamile Girardi (2017)
Os vírus da hepatite C (HCV) e da hepatite B (HBV) estão associados à cirrose e carcinoma hepatocelular. Amostras de sangue fixadas em papel filtro (ou Dried Blood Spot, DBS) têm sido utilizadas em análises clínicas devido à facilidade no envio e armazenamento e ao menor desconforto do paciente à coleta. Os objetivos deste trabalho foram validar testes moleculares para detecção de HCV e HBV, avaliar o uso de DBS (903 Whatman) na detecção de ambos os vírus e determinar os genótipos de amostras HCV. A validação foi realizada utilizando amostras de plasma com resultados conhecidos para os vírus e a avaliação do DBS empregou, também, amostras de plasma pareadas. Após a extração dos ácidos nucléicos, foram executadas as técnicas in-house de Real Time PCR para detecção de HBV, RT-Real Time PCR para HCV e sequenciamento para a genotipagem de HCV. Na validação do teste para HCV, foram utilizadas 120 amostras, obtendo resultados de Kappa (Κ), acurácia, sensibilidade e especificidade de 100%. Na avaliação do teste para HCV, utilizando DBS, com 128 amostras, os resultados de Kappa, acurácia, sensibilidade, especificidade também foram de 100%. Em 51 amostras, foram identificados os genótipos 1 (57%), 2 (10%) e 3 (33%). A validação do teste para HBV, com 54 amostras, obteve Kappa de 81%; acurácia, 91%; sensibilidade, 86%; e especificidade, 96%. A avaliação do uso de DBS para HBV, com 64 amostras, obteve Kappa de 74%; acurácia, 88%; sensibilidade, 82%; e especificidade, 100%. Todos os valores de Kappa possuem p<0,001. Os resultados demonstram o potencial de utilização de DBS no diagnóstico molecular dos vírus das hepatites B e C.