Clonagem e análise de expressão de sequências candidatas a ALMT1 e STOP1 em aveia (Avena sativa L.) - Dable, Ana Luisa Wentz (2018)
A presença de alumínio fitotóxico (Al) é característico de solos ácidos e um dos principais fatores de baixa produtividade das culturas nesses solos. A tolerância das espécies vegetais ao Al pode ser governada por diferentes genes. Os objetivos deste trabalho foram (i) comprovar que a aveia possui genes homólogos a outras espécies de gramíneas para tolerância ao Al por meio da identificação de sequências similares aos genes STOP1 e ALMT1; (ii) clonar essas sequências nos genótipos de aveia UFGRS 17 (tolerante) e UFRGS 930598-6 (sensível); (iii) identificar as regiões exônicas nas sequências; (iv) comparar as sequências entre os genótipos buscando identificar polimorfismos; (v) verificar a sequência proteica predita e possíveis diferenças de conformação e alterações em domínios de importância para a atividade proteica; (vi) avaliar a funcionalidade das sequências clonadas similares a STOP1 e ALMT1 no ápice radicular por meio da verificação da expressão relativa dos genes em condições normais e em estresse por Al e baixo pH. A identificação e caracterização de sequência homóloga a STOP1 mostrou que esse está presente em mais de uma cópia no genoma da aveia. As sequências encontradas não possuem íntrons. Duas sequências proteicas foram preditas para cada genótipo. Maiores diferenças foram encontradas em uma sequência presente em UFRGS 930598-6. Quatro potenciais domínios dedo de zinco foram detectados nas sequências obtidas. A avaliação da expressão relativa geral de STOP1 na situação controle, estresse por baixo pH e Al sugere funcionalidade de STOP1. As sequências de aveia estão mais próximas daquelas encontradas no gênero Triticum. O gene ALMT1 foi parcialmente sequenciado neste estudo comprovando a existência de mais de uma cópia no genoma da aveia. Foram preditos seis éxons e cinco íntrons. Seis domínios transmembranas próximos a região de terminação N foram identificados. Em UFRGS 930598-6, a predição proteica sugere pelo menos uma proteína truncada e outra funcional. A análise de expressão geral sugere que, em aveia, ALMT1 só é expresso quando exposto em condições de estresse por Al.