Fração contendo alto teor de isoflavonas da soja : obtenção e multicomplexação com ciclodextrina - Yatsu, Francini Kiyono Jorge (2014)
O presente trabalho teve como objetivos o desenvolvimento de uma fração enriquecida em isoflavonas de Glycine max (soja), na forma de agliconas (IEF), e sua associação simultânea a ciclodextrina; caracterização físico-quimica da fração e dos complexos sólidos correspondentes, e avaliação de sua permeabilidade intestinal in vitro em modelo de membrana artificial paralela (PAMPA) e celular (Caco-2). Para a avaliação qualitativa e quantitativa das agliconas em diferentes matrizes, foi desenvolvido e validado um método de análise por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), utilizando como fase estacionária coluna Phenomenex RP-18 e como fase móvel mistura de acetonitrila:ácido trifluoracético (100:0,01, v/v). O método desenvolvido demonstrou ser rápido, versátil, preciso, seletivo, específico e aplicável à determinação do teor das agliconas presentes em diferentes matrizes. A fração enriquecida em agliconas foi obtida a partir de um extrato seco de soja, por meio de extração com etanol, seguida de hidrólise ácida dos glicosídeos, cristalização das agliconas por adição de antissolvente e purificação por recristalização em etanol. A caracterização física, fisico-química e química das isoflavonas presentes nesta fração enriquecida foi realizada por microscopia eletrônica de varredura (MEV), granulometria por difração a Laser, difratometria de raios X em pós (DRX), espectroscopia em infravermelho com tranformada de Fourier (FT-IR), ressonâcia magnética nuclear (RMN) de hidrogênio (1H) e carbono (13C), espectroscopia na região do ultravioleta (UV), calorimetria exploratória diferencial (DSC), análise por CLAE, estabilidade frente ao calor e luz ultravioleta (UVC) e solubilidade aparente em água A fração apresentou um elevado conteúdo de agliconas (próxima a 90%), baixa solubilidade em água e sensibilidade ao calor e à luz UV. A partir dessa fração, foram preparados complexos sólidos com 2-hidroxipropil-β-ciclodextrina (HPβCD) empregando-se as técnicas de complexação em pasta/micro-ondas, liofolização, co-evaporação, spray drying e em micro-ondas. Os complexos sólidos preparados com HPβCD apresentaram solubilidade superior à fração e os resultados da caracterização físico-química sugerem, fortemente, a formação simultânea de complexos de inclusão e de associação entre as três isoflavonas e a HPβCD. Por fim, foi avaliada a permeabilidade intestinal in vitro dos complexos e de IEF em células Caco-2 e PAMPA. Os resultados obtidos indicam que a permeação da daidzeína e da genisteína ocorre predominantemente via transporte ativo, enquanto e permeação de gliciteína ocorre predominantemente via difusão passiva. Da mesma forma, sugere-se que a daidzeína e a genisteína possam compartilhar o mesmo sistema de transporte. A complexação de IEF com HPβCD causou um efeito negativo sobre a permeabilidade intestinal das isoflavonas, excetuando-se os complexos preparados por spray drying, os quais apresentaram uma melhora significativa da permeabilidade da genisteína (p < 0,05) e não modificaram a permeabilidade da daidzeína e gliciteína.