Identificação de fatores reguladores da expressão de genes ASR(ABA, Stress and Ripening) de arroz (Oryza sativa) - Schünemann, Mariana (2015)
Os estresses abióticos impostos à planta no campo, tais como o estresse salino, toxidez por alumínio, frio, seca, entre outros, afetam seu crescimento, desenvolvimento e produtividade. Dentre as gramíneas cultivadas, o arroz (Oryza sativa) é uma das culturas de maior importância no Brasil, cuja oscilação na produção acarreta prejuízos consideráveis à economia brasileira. Dessa forma, o estudo das interações entre os estresses abióticos e as respostas dos vegetais frente a esses estímulos ambientais é fundamental para um conhecimento detalhado desses mecanismos. O arroz é um dos cereais mais tolerantes ao alumínio (Al), sendo um ótimo modelo para o estudo de mecanismos de tolerância. Neste trabalho, foi estudado o papel das proteínas ASR na tolerância ao Al. A expressão dos genes ASR (ABA, Stress and Ripening) é induzida por ABA, estresses e amadurecimento do fruto. Essas proteínas foram caracterizadas como chaperonas e fatores de transcrição. Os genes da família OsASR também têm o nível de transcritos aumentado em resposta ao Al, sendo OsASR1 e OsASR5 os genes com expressão mais abundante em arroz. No entanto, as regiões promotoras responsivas ao Al e os fatores de transcrição reguladores da expressão desses genes ainda não foram descritos. Assim, este trabalho tem como objetivo geral a identificação dos fatores que regulam a transcrição dos genes OsASR1 e OsASR5. Para tanto, construções contendo fragmentos dos promotores desses genes dirigindo a expressão do gene repórter GUS foram obtidas, visando ensaio de expressão transiente em protoplastos de arroz submetidos ao tratamento com Al. Os fragmentos das regiões promotoras de ambos os genes OsASR1 e OsASR5 foram todos responsivos ao Al. Também foi realizado ensaio de transativação em protoplastos de Arabidopsis thaliana para verificar a existência de auto-regulação nesses genes. Tanto ASR1 quanto ASR5 foram capazes de transativar seus próprios promotores. Além disso, foi realizada uma triagem de biblioteca de cDNAs por mono-híbrido em levedura com fragmento da região promotora de OsASR5. Com essa abordagem, foram identificados sete genes candidatos a codificadores de fatores capazes de interação DNA-proteína.