Mutagenicidade no locus responsável pela resistência ao fungicida cloroneb em Aspergillus nidulans - Elisbão, Tadeu (1980)
Esta investigação foi levada a efeito com o objetivo de estudar geneticamente o fenômeno da resistência ao fungicida cloroneb (1,4-dicloro-2,5-dimetoxibenzeno) em Aspergillus nidulans. Através de mutações espontâneas foram obtidos 6 mutantes resistentes ao cloroneb, a partir de linhagens sensíveis. Esses mutantes foram caracterizados quanto à capacidade de crescimento em doses crescentes do fungicida verificando-se que todos eram semidependentes de cloroneb, requerendo à presença da droga no meio de cultura para que suas colônias alcançassem o desenvolvimento máximo. Diplóides construídos entre linhagens resistentes e sensíveis mostraram que a mutação para a resistência foi recessiva em uma linhagem, semidominante em outra e dominante em 4 outras. Em 3 destas últimas linhagens encontrou-se indícios de sobredominância. Submetidos à análise genética, todos os 6 mutantes revelaram que a resistência era devida a um único gene. Em cada um dos mutantes a análise mitótica atribuiu ao grupo de ligação III o loco responsável pela resistência e a análise meiótica permitiu mapear esse loco a uma distância média de 34 unidades de mapa do marcador galA1. Ensaios de alelismo comprovaram que todas as 6 mutações pertenciam ao mesmo loco. Procurando-se obter mutantes sensíveis a partir de duas linhagens resistentes ao cloroneb (CHL-1 e CHL-13) apurou uma linhagem realmente sensível e outras 3 que continuavam resistentes mas tinham sofrido alterações nos graus de resistência e ou semidependência. Duas linhagens sensíveis e duas resistentes foram submetidas a 4 diferentes tratamentos mutagênicos: ácido nitroso, metano - sulfonato de etila, dietilsulfato e 8 - metoxipsoraleína associada à luz ultravioleta longa. Foram traçadas curvas de sobrevivência para cada linhagem em cada tratamento e, com base em tais curvas, estimou-se as doses apropriadas para futuros procedimentos. Procurou-se induzir mutantes resistentes a partir das linhagens sensíveis e vice-versa. Através das frequências de setores mutantes emitidos por colônias monospóricas, advindas de conídios submetidos aos tratamentos, não se detectou efeito residual de nenhum dos mutagênicos. Uma das linhagens sensíveis (proA1; pabaA6; yA2) revelou-se adequada para se quantificar os efeitos dos tratamentos mutagênicos sobre a indução de resistência ao cloroneb já que os mutantes, em meio de cultura adequado, produzem conídios que constrastam francamente com os da linhagem sensível original. Foi sugerido um sistema para a averiguação da capacidade mutagênica de substância suspeitas baseado na indução de resistência ao cloroneb em A. nidulans.