Análise por sequenciamento paralelo de larga escala de uma coorte de pacientes com distúrbios/diferenças do desenvolvimento do sexo 46,XX testicular e ovotesticular SRYnegativo - Ferrari, Maria Tereza Martins (2023)
O desenvolvimento gonadal em mamíferos é um processo dinâmico e complexo, que requer a interação de múltiplos fatores em um meticuloso sistema de retrocontrole e autorregulação. Defeitos nos genes envolvidos nestes processos são uma das causas dos distúrbios/diferenças do desenvolvimento do sexo (DDS). A diferenciação ovariana é o resultado normalmente esperado para o desenvolvimento gonadal em fetos 46,XX. Entretanto, em raros casos, as gônadas de indivíduos 46,XX podem se diferenciar completamente em testículos, condição conhecida como DDS 46,XX testicular (DDS 46,XX T) ou, ainda, ocorrer a coexistência de tecidos testicular e ovariano em um mesmo indivíduo, dando origem ao DDS 46,XX ovotesticular (DDS 46,XX OT). O gene SRY, um importante fator determinante testicular, é identificado em uma fração de pacientes com DDS 46,XX testicular e ovotesticular (DDS 46, XX T/OT), sendo o responsável pelo desenvolvimento gonadal masculino nestes pacientes. Porém, o estudo de várias coortes de pacientes DDS 46, XX T/OT demonstrou que o SRY não é o único gene associado a esses fenótipos. A etiologia heterogênea dessas condições dificulta a análise molecular pelas estratégias tradicionais de estudo de genes candidatos. As novas estratégias de sequenciamento paralelo em larga escala, com avaliação global do material exômico/genômico do indivíduo, veio facilitar a análise simultânea de vários genes já reconhecidos, como também permitir a identificação de novos genes possivelmente envolvidos na etiologia dos DDS. Baseado neste contexto, o presente estudo teve como objetivo principal estabelecer o diagnóstico molecular em um grupo de portadores de DDS 46,XX T/OT sem diagnóstico molecular definido, utilizando a técnica de sequenciamento completo do exoma. O sequenciamento foi realizado na plataforma Illumina. Os dados brutos foram analisados utilizando um pipeline para a identificação de variantes de ponto, indels e variações do número de cópias. As variantes foram classificadas de acordo com os critérios do American College of Medical Genetics. Vinte e quatro pacientes com DDS 46,XX T/OT SRY-negativo foram avaliados, 22 com diagnóstico histológico de DDS OT e dois com diagnóstico não histológico de DDS T. A casuística incluiu 22 pacientes com doença esporádica e uma família com dois irmãos afetados. Em 29,1% (7/24) dos pacientes investigados foi possível identificar um gene candidato associado ao fenótipo. Nenhum gene candidato foi identificado nos dois pacientes com diagnóstico provável de DDS 46,XX T. Das variantes selecionadas como possíveis candidatas à etiologia da doença, duas variantes foram classificadas provavelmente patogênicas (genes FLNB e SOX10) e quatro variantes como de significado incerto, destacando-se as variantes nos genes IMMP2L, SOX8, PRKACG e CLASP1. A variante alélica c.397delT (p.Ser133Leufs7* no IMMP2L foi identificada em heterozigose nos dois irmãos com DDS 46,XX OT e estava ausente nos familiares não afetados (mãe e irmão). As descrições prévias da associação entre o gene Immp2l e a função reprodutiva em mamíferos bem como seu potencial papel na etiologia de linhagens de ovelhas portadoras de XX female-to-male sex reversal, reforçam nossos achados e a possível contribuição desse gene no fenótipo em questão. As variantes alélicas: c.C1329A (p.Ser443Arg) do gene SOX10 e c.C2822A (p.Pro941Gln) do gene FLNB, classificadas como potencialmente patogênicas, também despertaram interesse como potenciais novos genes candidatos. Evidências indicam possíveis interações indiretas dessas proteínas com a regulação do SOX9. O papel de destaque dos genes da família SOX, no processo do desenvolvimento testicular conduziram ao estudo da variante alélica candidata identificada no gene SOX8, categorizada como VUS. Da mesma forma, as variantes alélicas c.A971G (p.Asp324Gly) e c.C3475T (p.Arg1159Cys) identificadas nos genes PRKACG e CLASP1, respectivamente, classificadas como VUS, foram consideradas candidatas. O PRKACG potencialmente interage com genes críticos da cascata da determinação gonadal masculina e já foi anteriormente associado à etiologia de disgenesia gonadal 46,XY. Neste estudo, a segregação das variantes identificadas só pode ser realizada em 25% dos casos, porque os pais não estavam disponíveis para análise nos outros pacientes. A ausência de disponibilidade dos trios limitou a avaliação e a classificação das novas variantes alélicas candidatas. Embora estabelecer a etiologia genética das anormalidades do desenvolvimento gonadal em portadores de 46,XX DDS OT/T permaneça um desafio, os resultados deste estudo geraram informações inéditas, que abrem novas perspectivas de estudo dos mecanismos envolvidos no desenvolvimento gonadal humano, uma complexa e fascinante área da ciência