Efeito da terapia combinada entre metformina e bevacizumabe na população de células iniciadoras de tumor em carcinoma de mama murino - Antonio, Heriton Marcelo Ribeiro (2015)
Células iniciadoras de tumor (CITs) estimuladas por hipóxia induzida limitam a eficácia de agentes antiangiogênicos no câncer de mama. A metformina tem demonstrado ser eficaz contra várias formas de câncer. O uso de medicamentos antiangiogênicos em combinação com metformina parece ser uma estratégia eficaz para tratar o câncer de mama. Analisamos a influência de metformina combinada com bevacizumabe em CITs no câncer de mama. Utilizando uma dose de 10mM de metformina, células 4T1 foram cultivadas durante 48 horas, e após, a positividade para PI / Anexina foram analisadas em citometria de fluxo, como indicador de morte celular. Células tratadas com metformina apresentaram um percentual médio maior de células PI+ quando comparadas ao grupo controle (12,8 ± 1,2% e 22,7 ± 2,2%) respectivamente (p = 0,005). No ensaio in vitro, células 4T1 foram tratadas com metformina (10mM), o percentual médio de células ALDH1+ em 4T1 foi de 28,8 ± 4% no grupo controle, e 15,6 ± 3,5% no grupo exposto à metformina por 48h (p = 0,01). Após 7 dias em cultura o número médio de esferas formada foi de 0,28 ± 0,03 esferas/1000 células no grupo controle e 0,14 ± 0,04 esferas/1000 células no grupo tratado com metformina (p = 0,007). No ensaio in vivo, foi implantado em camundongos BalbC, triplicatas com: 500, 5.000 e 45.000 células para cada população de células: ALDH1+; ALDH1- e ALDH1. As células foram previamente separadas no aparelho BD FACSAriaTM. Após 21 dias, somente células ALDH1+ foram capazes de desenvolver tumores em todas as concentrações (500, 5.000 e 45.000 células). Com o ensaio de diluição limitante, foi encontrada uma diferença significativa na presença de CITs, ao comparar células ALDH1+ com células ALDH-, foi encontrada uma prevalência de 1/455 CITs (IC 95%, de 1.948 para 107) em células ALDH1+ e 1/5.361 CITs (IC 95%, de 21.557 para 1.333) em células ALDH1- (p = 0,01). Em células ALDH1 a prevalência de CITs foi de 1/2086 (IC 95%, de 7.466 para 583). Camundongos portadores de tumores de enxertos de células 4T1 (n = 5, por grupo), foram divididos em 4 grupos: (1) controle, (2) tratados com metformina via oral ad libitum (200µg/ml), (3) tratados com metformina em combinação com bevacizumabe (5mg/kg SC duas vezes por semana) ou (4) tratado apenas com bevacizumabe. Os camundongos tratados com metformina ou bevacizumabe isolados ou combinados desenvolveram tumores com menor volume, quando comparados ao grupo controle. No entanto, nos tumores de camundongos tratados somente com bevacizumabe, quando comparado com o grupo controle, foi observada um aumento na população de células ALDH1+ (p = 0,04) e também uma maior expressão do gene ALDH1A1 (p < 0,0001). Concluímos através do estudo in vitro, que a metformina foi capaz de diminuir a população de CITs na linhagem 4T1. ln vivo a metformina administrada como droga única apresentou a capacidade de diminuir a concentração de CITs, e quando administrada combinada com bevacizumabe, conseguiu controlar o aumento da concentração de CITs, observado no grupo tratado somente com bevacizumabe.