Associação de Alantolactona ou inibidores de p38MAPK com Cisplatina como uma estratégia para atingir a população de células tronco tumorais em câncer de mama triplo-negativo - Lomba, Ana Luíza Oliveira (2025)
ANTECEDENTES: O câncer de mama triplo-negativo (TNBC) é um subtipo agressivo de câncer de mama caracterizado pela ausência de receptores de estrogênio, progesterona e HER2. Ele possui opções de tratamento limitadas e tende a crescer e se espalhar mais rapidamente do que os outros subtipos de câncer de mama. Notavelmente, sua alta taxa de recorrência e resistência às terapias padrão podem estar associadas a uma pequena, mas altamente dinâmica subpopulação de células conhecidas como células-tronco tumorais (CSCs), que possuem a capacidade de se autorrenovar e iniciar tumores com alta frequência. A proteína da membrana celular Cripto-1 (CR1) é uma proteína embrionária ligada a GPI com competências cruciais de pluripotência, que reaparece em diferentes tipos de carcinomas humanos, especialmente nos TNBCs, para manter a população de CSCs. Embora o CR1 pareça ser um candidato promissor a ser negativamente regulado durante a progressão do TNBC, há uma imagem incompleta dos fatores que podem abrogar as funções do CR1. Estudos anteriores demonstraram que a Alantolactona (ALT) interrompe a interação do CR1 com o receptor de Activina tipo 2A (ACVR2A), que é essencial para a sinalização do CR1 por meio de sua via canônica. Outros estudos mostraram que a ativação da quinase ativada por mitógeno p38 (MAPK) regula a expressão do principal ligante do CR1, Nodal, durante a embriogênese inicial e é necessária para a especificação de cardiomiócitos murinos a partir de células-tronco embrionárias. OBJETIVOS: Sabendo da importância do CR1 e p38MAPK em manter a população de CSCs e considerando a necessidade de melhorar a resposta de pacientes com TNBC às terapias padrão, investigamos neste trabalho os efeitos do tratamento com ALT e da inibição de p38MAPK em linhagens celulares de TNBC resistentes à Cisplatina (CIS). MÉTODOS: Para isso, as células do subtipo mesenquimal de TNBC (M-TNBC) MDA-MB-231, BT549 e Hs578-T foram tratadas com diferentes concentrações de CIS isoladamente ou em combinação com ALT, assim como foram pré-tratadas e co-tratadas com os inibidores de p38MAPK PD169316 ou PH797804 isoladamente ou em combinação com CIS. A viabilidade celular foi medida em todos os tratamentos através do ensaio MTT, e o perfil do ciclo celular foi avaliado por coloração com iodeto de propídio. Outros parâmetros, como os níveis de transcrição de CRIPTO-1 e outro marcador pluripotência, OCT4, foram avaliados por RT-qPCR, e os níveis de superfície do CR1 foram analisados por citometria de fluxo. Além disso, as mesmas condições testadas nas linhagens celulares foram utilizadas para tratar organóides tumorais derivados de pacientes (PDTOs), para verificar se efeitos semelhantes seriam observados em estruturas celulares tridimensionais (3D) que imitam um tumor real de TNBC. Para avaliar os efeitos do tratamento nos PDTOs, a viabilidade foi medida pelo ensaio CellTiter Glo 3D, e seu tamanho foi medido usando o software Image J. RESULTADOS: Os resultados demonstram que o pré-tratamento ou co-tratamento de ALT com CIS não foi capaz de diminuir a atividade metabólica das linhagens celulares testadas. O co-tratamento de linhagens celulares de TNBC com altas doses de PH787904 e CIS conseguiu reduzir significativamente a viabilidade das células MDA-MB-231 quando comparado ao monotratamento com CIS. Um resultado semelhante foi observado em células MDA-MB-231 pré-tratadas com PD169316 por 24 horas antes do tratamento com CIS. O tratamento com inibidores de p38MAPK, seja PH787904 ou PD169316, também levou a uma downregulação dos níveis de RNA de CRIPTO-1 e OCT4, e a uma redução dos níveis de proteína CR1, o que pode explicar por que o CIS foi mais eficaz em combinação do que isoladamente. No entanto, essa redução da viabilidade não foi significativa em PDOs pré-tratados com PD169316 quando comparados ao monotratamento com CIS. Esses resultados sugerem que, ao inibir p38MAPK, é possível aumentar a resposta das células de TNBC ao agente quimioterápico convencional CIS, diminuindo a população de CSCs mantida pelo CR1. Investigações adicionais são necessárias para confirmar esses resultados, como o perfil molecular de outros marcadores de CSC que atuam com o CR1, como OCT4