Estudo da modulação de células de papila apical ativadas na indução da osteoclastogênese in vitro - Rahhal, Juliana Garuba (2025)
Quando ocorrem lesões no tecido pulpar de dentes em desenvolvimento, há interrupção da formação radicular, resultando em raízes curtas, paredes dentinárias delgadas e áreas de reabsorção óssea no periápice. Sendo assim, a Endodontia Regenerativa surgiu como uma alternativa promissora ao tratamento de dentes com rizogênese incompleta e necrose pulpar, por meio da regeneração biológica dos tecidos dentários. Lesões endodônticas são desencadeadas por necrose pulpar e infecções bacterianas, que levam a áreas de reabsorção óssea na região apical. Bactérias gram-negativas, predominantes em dentes com necrose pulpar e periodontite apical, liberam endotoxinas que intensificam essa resposta inflamatória. A osteoclastogênese, responsável pela remodelação óssea é regulada por fatores como o M-CSF (fator estimulador de colônia de macrófagos) e o sistema RANK/RANKL (Receptor Activator of Nuclear factor-Kappa B e seu respectivo ligante L). Em condições inflamatórias, o aumento de RANKL promove maior ativação de osteoclastos, resultando em uma maior reabsorção óssea, característica de doenças periodontais e lesões periapicais. As células-tronco da papila apical (SCAPs) vêm sendo amplamente investigadas nessa abordagem devido ao seu alto potencial proliferativo, osteo/odontogênico e imunomodulador. Contudo, o papel dessas células frente à reabsorção óssea associada à inflamação, particularmente na modulação da osteoclastogênese, permanece pouco elucidado. Assim, este estudo buscou investigar se células da papila apical ativadas por lipopolissacarídeos (LPS) de Escherichia coli podem modular o processo de osteoclastogênese in vitro, contribuindo para o entendimento da interação dessas células com processos inflamatórios e reabsorção óssea. O trabalho foi dividido em três fases experimentais. Na primeira fase, SCAPs foram isoladas de terceiros molares humanos, caracterizadas fenotipicamente por citometria de fluxo (marcadores STRO-1, CD146, CD34 e CD45) e avaliadas quanto à capacidade de diferenciação osteo/odontogênica. Na segunda fase, as células foram estimuladas com LPS e analisadas quanto à viabilidade celular e produção de citocinas relacionados à osteoclastogênese, como OPG (osteoprotegerina), RANKL (Receptor Activator of Nuclear Factor-Kappa B Ligand), M-CSF (fator estimulador de colônia de macrófagos) e IL-6 (interleucina-6) por ELISA. Na terceira fase, o meio condicionado (MC) obtido das SCAPs foi utilizado para tratar monócitos humanos isolados de sangue periférico, os quais foram induzidos à diferenciação osteoclástica. Foram realizadas análises de atividade e marcação para fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP), detecção de anéis de actina, imunofluorescência para TRAP e catepsina K, além da quantificação da expressão gênica de catepsina K (CTSK), receptor de calcitonina (CALCR) e fosfatase ácida resistente ao tartarato (TRAP) por transcrição reversa seguida de reação em cadeia da polimerase quantitativa (RT-qPCR). O efeito do MC na própria diferenciação osteogênica das SCAPs também foi investigado. Os resultados mostraram que as SCAPs mantêm viabilidade após o estímulo com LPS, com aumento significativo na produção de IL-6 e diminuição da secreção de OPG. O MC das SCAPs, tanto controle quanto ativado por LPS, foi capaz de reduzir significativamente a formação de osteoclastos multinucleados TRAP-positivos, a organização de anéis de actina, a expressão de TRAP e catepsina K e os níveis dos genes osteoclásticos analisados. Esses achados indicam que o microambiente gerado pelas SCAPs exerce um efeito inibitório sobre a osteoclastogênese, mesmo na presença de um estímulo inflamatório. Além disso, o MC promoveu a diferenciação osteogênica das SCAPs de forma diluição-dependente, sugerindo um potencial efeito autócrino benéfico. Conclui-se que SCAPs humanas possuem a capacidade de modular negativamente a osteoclastogênese induzida por monócitos, mesmo após ativação por LPS, além de favorecerem sua própria diferenciação osteogênica. Tais propriedades reforçam o papel imunomodulador e regenerativo dessas células e sustentam seu potencial terapêutico na Endodontia regenerativa, especialmente em contextos inflamatórios e reabsortivos como as lesões periapicais.