Análise da resposta humoral induzida pela infecção com o vírus Dengue utilizando proteínas recombinantes do envelope deste vírus produzidas em sistema eucarioto ou procarioto. - Zaneti, Arthur Baruel (2019)
Os Flaviviridae são uma família de vírus de RNA transmitidos principalmente por artrópodes que podem infectar seres humanos. Os membros dessa família causam um grande número de infecções e apresentam considerável morbidade e mortalidade. No Brasil, temos a circulação do vírus Dengue (DENV), presente no país há décadas sendo responsável por diversas epidemias recorrentes, além de outros Flavivirus, como o vírus da febre amarela (YFV) e, mais recentemente, vírus Zika (ZIKV). Os quatro sorotipos de DENV (DENV1- 4) apresentam aproximadamente 65% a 70% de similaridade em sua sequência de aminoácidos, o que pode ter implicações em sua patogênese, com a amplificação de infecções secundárias com sorotipos heterólogos do vírus através de imunocomplexos entre o vírus e anticorpos sub-neutralizantes, ou em sua proteção, com a indução de anticorpos neutralizantes de reatividade cruzada. Justifica-se então a necessidade de se utilizar proteínas recombinantes de DENV que representem de forma realista as proteínas nativas do vírus em estudos que visam analisar a resposta humoral induzida em infecções pelo DENV. Entre as alternativas de sistemas de expressão de proteínas recombinantes, o sistema de células de inseto tem se mostrado efetivo por gerar proteínas mais similares às nativas quando comparado ao sistema de expressão em bactérias. Por isso, em nosso trabalho produzimos proteínas recombinantes do envelope (E) de DENV e também seus domínios: domínio I e II (EDI/II) e domínio III (EDIII) em células S2 de Drosophila. Com estas, avaliamos a reatividade cruzada do soro de pacientes previamente infectados pelo DENV contra as proteínas E de DENV2 e DENV3. Além disso, com estes soros também analisamos a resposta humoral gerada contra cada domínio (EDI/II e EDIII) da proteína E de DENV2 e avaliamos a capacidade de neutralização dos soros contra o DENV2. Por fim, comparamos as proteínas E recombinantes de DENV2 produzidas em células S2 ou bactérias. As proteínas produzidas em sistema eucarioto apresentaram uma conformação mais próxima à nativa e melhor especificidade e sensibilidade que as proteínas produzidas em sistema procarioto e, por isso, mostraram-se melhores alternativas para o estudo da resposta humoral induzida contra o DENV.