Avaliação in vitro da suscetibilidade de biofilme multiespécies às soluções de peróxidos - Coimbra, Flávia Cristina Targa (2018)
O objetivo desse estudo in vitro foi avaliar a efetividade antimicrobiana de higienizadores à base de peróxidos frente a biofilme multiespécies e o impacto dessas soluções na redução da carga microbiana, atividade metabólica e do biofilme agregado. A partir de matrizes circulares metálicas (15 x 3 mm), foram confeccionados corpos de prova de resina acrílica termopolimerizável os quais foram esterilizados em micro-ondas (650W, por 6 minutos) e inoculados com suspensão de 105 UFC/mL de Candida albicans (Ca) e 106 UFC/mL de Staphylococcus aureus (Sa) e de Pseudomonas aeruginosa (Pa). Após contaminação, os corpos de prova foram incubados a 37 ºC por 20 h e, em seguida, por meio de uma cesta de aço inoxidável, foram imersos em Béquer com as seguintes soluções, de acordo com as instruções do fabricante (n=9): Grupo CP (Controle positivo) - imersão em PBS (Phosphate-Buffered Saline); Grupo MI NitrAdine e Grupo FX Fixodent. Em seguida, foram lavados (PBS) e imersos em meio de cultura Letheen, para a avaliação da esterilidade e obtenção de diluições seriadas (100 a 10-3), as quais foram semeadas em meios de cultura específicos: CHROMagar Candida para C. albicans, Manitol Salt Agar para S. aureus e Agar Cetrimide para P. aeruginosa. Após incubação, de acordo com morfologia típica, o número de colônias características foi mensurado e o número de UFC/mL calculado. A avaliação da atividade metabólica foi realizada pelo método de redução do XTT e a viabilidade celular foi avaliada por microscopia de epifluorescência (n=2). Os dados obtidos para as variáveis de UFC/mL (Sa e Pa), Unidades de Absorbância e Percentual de Área, foram avaliados pelo teste de Kruskal-Wallis, seguido pelo teste de Dunn (=0,05). Para comparação entre os dados vinculados (Percentual de área de células vivas e totais) empregou-se também o teste de Wilcoxon. Os dados da variável de UFC/mL para C. albicans foram avaliados pelo teste de ANOVA e pós-teste de Tukey, uma vez que apresentaram distribuição normal. Os resultados de UFC/mL mostraram diferença significativa entre os grupos (Ca p=0,002, Pa p<0,001e Sa p<0,001) havendo redução significante do número de UFC/mL de C. albicans [MI: 2,13 (1,17)], de P. aeruginosa [FX: 2,96 (1,76 4,17) e MI: 0,00 (-0,43 2,06)] e S. aureus [FX: 3,59 (2,97 4,31) e MI: 1,90 (0,40 3,01)], quando comparado aos grupos controles [CP:Ca: 4,02 (0,85), CP:Pa: 6,43 (6,02 6,61) e CP:Sa: 5,67 (5,41 6,31)]. Houve redução da atividade metabólica do biofilme multiespécies (p<0,001), em ambas as soluções higienizadoras [FX: 0,001 (-0,006 0,058) e MI: 0,000 (- 0,002 0,066)] quando comparadas ao Grupo Controle [CP: 0,068 (0,046 0,190)]. As imagens da microscopia de epifluorescência revelaram redução significativa da área de biofilme agregado sobre os corpos de prova após a imersão nos higienizadores [FX: 85,19 (77,23 86,42) e MI: 78,42 (70,91 81,65)] quando comparados ao grupo controle (p<0,001). Na comparação entre as áreas de biofilme vivo e total pode-se observar diferenças entre as áreas do biofilme multiespécies (p<0,001), após a imersão nos higienizadores avaliados. Conclui-se que os higienizadores de prótese conseguiram reduzir a atividade metabólica bem como o biofilme agregado, embora nenhum higienizador tenha conseguido remover completamente o biofilme multiespécies. O higienizador NitrAdine foi o mais efetivo na redução da carga microbiana do biofilme multiespécies. A P. aeruginosa foi mais suscetível a ação dos higienizadores do que o S. aurueus e C. albicans, quando associada em biofilme multiespécies