Otimização de metodologia para o preparo de colunas capilares para cromatografia líquida - Freitas, Silvia de Sousa (1999)
Colunas capilares empacotadas (d.i. < 500 μm) têm sido muito utilizadas em cromatografia líquida (Capillary-LC) com um grande número de vantagens, incluindo implicações econômicas e ambientais do uso de menos solvente e material de empacotamento . A pesquisa em técnicas de empacotamento de colunas ainda é um dos mais importantes aspectos no desenvolvimento da cromatografia líquida capilar. A técnica de empacotamento mais utilizada é a denominada \"slurry packing\", onde um solvente sob alta pressão é usado para empurrar a suspensão, contendo partículas de fase estacionária, para dentro da coluna formando o leito cromatográfico . Muitas variáveis do processo de empacotamento são consideradas importantes para definir a eficiência, bem como as propriedades mecânicas da coluna. Este trabalho mostra os resultados de uma detalhada investigação sobre a influência destas variáveis na qualidade das colunas capilares de sílica fundida, como: (a) tempo de despressurização do sistema de empacotamento; (b) comprimento do restritor; (c) pressão de empacotamento; (d) tempo de pressurização ;(e) concentração da suspensão;(f) tempo de ultra-som . Tubos de sílica fundida (d.i. 250 e 25 μm), fases estacionárias com partículas esféricas de 5 μm (octadecil, octil, hexil e metil silano) e um sistema pneumático de empacotamento foram utilizados para o preparo das colunas. O sistema cromatográfico usado para o teste das colunas constitui-se de uma bomba seringa Phoenix 20 e de um detector equipado com uma micro-cela (35 nL) em \'U\' (Fisons). As injeções foram feitas via um micro-injetor com um \"loop\" interno de 60 nL. As colunas foram conectadas ao sistema através de uma anilha de teflon desenvolvida neste laboratório. Acetonitrila/água (70:30) foi utilizada como solvente de empacotamento e fase móvel. Uma mistura contento uracila, naftaleno, fenantreno e antraceno foi usada para avaliar as colunas. Para cada coluna preparada foram obtidos cromatogramas em vários fluxos volumétricos (entre 2 e 10 μL/min), com detecção à 254 nm. Uma coluna convencional (d.i.= 4,6 mm) foi testada em um cromatógrafo líquido convencional (HPLC) e os resultados foram comparados com os obtidos com as colunas capilares. Os resultados obtidos neste trabalho mostraram que com o uso de valores apropriados para as variáveis estudadas foi possível obter uma metodologia de empacotamento capaz de fornecer colunas capilares com ótimo desempenho. A cromatografia líquida capilar (Capillary-LC) mostrou uma melhor eficiência e economia de 99,8 % de solvente em relação à cromatografia líquida convencional (HPLC).