Interação entre o fator de ativação plaquetária (PAF) e Trypanosoma cruzi: ação biológica e aspectos moleculares de possível receptor - Ambrosio, Luciana (2003)
A doença de Chagas é causada devido à infecção pelo protozoário Trypanosoma cruzi (T. cruzi) e representa um dos principais problemas de saúde pública dos países latino-americanos. Dados da literatura tem sugerido a presença de um receptor de \"platelet-activating factor\" (PAF) em T. cruzi, visto que esse mediador lipídico induz, por ação direta no parasita, secreção de enzimas, diferenciação celular e transdução de sinais. Os objetivos desse trabalho foram o estudo de algumas ações biológicas de PAF sobre T. cruzi e a análise molecular preliminar de um possível gene para receptor desse mediador lipídico em T. cruzi. Suspensões de tripomastigotas foram tratadas com PAF e os efeitos biológicos decorrentes foram monitorados por ensaios de transformação morfológica in vitro, migração de parasita para cavidades artificiais de camundongos pré-infectados com esse parasita e ensaios espectrofluorimétricos para quantificação de influxo de cálcio. Os resultados obtidos através desses experimentos mostram que PAF (10-6M) induz transformação de 30% de formas tripomastigotas para amastigotas símile após 120 minutos de incubação. lnteressantemente, esse efeito foi bloqueado, em aproximadamente 50%, por Toxina Pertussis ou Veragensin. Além disso, o PAF induziu migração do parasita para bolsa de ar dorsal em camundongos infectados, de modo dose-dependente, sendo a dose mais efetiva de 10-6M. Esse mediador foi também capaz de induzir influxo de cálcio em tripomastigotas de modo dependente das doses utilizadas e dos tempos de incubação do parasita com o mesmo. A investigação da presença de um gene para o receptor de PAF em T. cruzi foi feita através de reações de amplificação em cadeia (PGR) a partir de cDNA e/ou DNA genômico, derivados de diferentes formas de T. cruzi. Nessas reações de PCR foram utilizados oligonucleotídeos homólogos ao gene de receptor de PAF em mamíferos. A partir do cDNA das formas tripomastigotas e DNA genômico de epimastigotas de T. cruzi foi possível amplificar fragmentos de DNA com esses oligonucleotídeos. Isto sugere que a expressão desse receptor possa ser estágio-específica. Finalmente, os fragmentos de DNA obtidos foram submetidos à clonagem e posterior seqüenciamento e os resultados preliminares mostram que um desses fragmentos (350 pares de base) apresentou homologia com receptores de mamíferos do tipo \"serpentin-like\". Com base no conjunto de resultados obtidos, sugerimos que o PAF é capaz de modular alguns eventos biológicos em T. cruzi, via interação com um possível receptor acoplado à proteína G. Esses achados poderão auxiliar nos estudos da interação T. cruzi com o sistema imune do hospedeiro vertebrado e nos estudos de fisiopatologia da doença de Chagas.