Papel das armadilhas extracelulares de neutrófilos na patogênese da doença inflamatória intestinal experimental - Ramos, Anderson dos Santos (2025)
As doenças inflamatórias intestinais (DII), como a colite ulcerativa e a doença de Crohn, são caracterizadas por inflamação crônica da mucosa intestinal e ruptura da integridade da barreira epitelial. Entre os mecanismos fisiopatológicos das DII, os neutrófilos e suas armadilhas extracelulares (NETs) emergem como elementos relevantes. As NETs, estruturas compostas por DNA e proteínas antimicrobianas e inflamatórias, desempenham um papel na defesa contra patógenos, mas também podem contribuir para danos teciduais no hospedeiro. Evidências recentes indicam que o acúmulo de NETs contribui para a persistência da inflamação e lesão tecidual em diversas condições inflamatórias, incluindo as DII. Estudos prévios relatam um aumento significativo de NETs em biópsias colônicas, e em amostras fecais e sanguíneas de pacientes com colite ulcerativa e doença de Crohn, correlacionando sua presença com maior atividade inflamatória e dano histológico. Contudo, o papel preciso das NETs na modulação da inflamação intestinal e os mecanismos moleculares subjacentes ainda carecem de elucidação. Assim, o presente estudo teve como objetivo principal elucidar o papel das NETs como mediadores da inflamação e da disfunção epitelial na colite. Para isso, empregamos abordagens farmacológicas e genéticas para inibir sua formação, tendo como alvo a enzima PAD4, crucial para a citrulinação de histonas e a consequente descondensação da cromatina durante a NETose. Utilizamos o GSK-484, um inibidor seletivo da PAD4, além de camundongos com deleção condicional do gene Padi4 em neutrófilos (Padi4Flox/FloxLγ6gCre/Wt). Inicialmente, demonstramos aumento significativo nos níveis de NETs no cólon, plasma e lavado intestinal de camundongos com colite aguda. Adicionalmente, observamos concentração reduzida de DNase Gama, uma das principais enzimas responsáveis pela degradação de NETs, no cólon inflamado, sugerindo desequilíbrio entre a formação e remoção (clearance) dessas estruturas. A inibição farmacológica da PAD4 e a deleção condicional de Padi4 em neutrófilos levaram a redução significativa de NETs e à atenuação de parâmetros macroscópicos da colite, como perda de peso, escore clínico e encurtamento do cólon, assim como do escore histológico. Adicionalmente, observamos diminuição significativa nas concentrações de citocinas pró-inflamatórias (TNF-α, IL-1α, IL-1β, IL-6 e IFN-γ), além da redução de quimiocinas e fatores de crescimento. Esses efeitos foram acompanhados por redução da permeabilidade intestinal, avaliada pelos níveis séricos de FITC-dextrano, redução da bacteremia, quantificação de rDNA16S no sangue e recuperação dos níveis de expressão dos genes Ocln e Tjp1, que codificam proteínas de junção epitelial, no cólon. Adicionalmente, a inibição da NETose resultou em redução na frequência e número de neutrófilos, monócitos inflamatórios e células dendríticas inflamatórias no cólon, sugerindo que as NETs contribuem para o recrutamento e/ou ativação de células mieloides durante a colite. No compartimento epitelial, a inibição da NETose preservou a população de células epiteliais EpCAM+ e favoreceu a manutenção de células epiteliais proliferativas (Ki-67+), sugerindo o envolvimento das NETs na disfunção da integridade e proliferação epitelial. Em conjunto, nossos achados indicam que as NETs funcionam como mediadores inflamatórios na colite, contribuindo para a disfunção epitelial e a exacerbação da resposta imune. A modulação da formação ou do acúmulo de NETs emerge como uma estratégia terapêutica promissora para a preservação da homeostase da mucosa intestinal em doenças inflamatórias intestinais.