Desenvolvimento, caracterização e atividade antitumoral de nanocarreador híbrido com extrato alcaloídico de Solanum lycocarpum - Carvalho, Ivana Pereira Santos (2022)
Solanum lycocarpum é uma espécie do cerrado brasileiro conhecida por sua diversidade em glicoalcalóides (GA). Os GA, solasonina (SS) e solamargina (SM), extraídos dos frutos desta planta, apresentam propriedades antitumorais. No entanto, a baixa solubilidade em água destas moléculas e a sua toxicidade limita a aplicação destes GA. O desenvolvimento de uma formulação nanoestruturada contendo GA poderá melhorar a ação antitumoral dos GA e potencializar o seu efeito na terapia do câncer de bexiga (CB). Assim, este projeto visa o desenvolvimento e caracterização de nanocarreador lipídico híbrido (NH), composto de carreador lipídico nanoestruturados revestidos com quitosana, como um sistema de liberação do extrato alcaloídico de S. Lycocarpum (EA), rico em GA, e avaliação antitumoral in vitro em cultura de 2D e 3D de células de câncer de bexiga. Os NH-EA foram preparados pelo método de emulsão e sonicação. NH-EA foram caracterizadas de acordo com diâmetro médio, distribuição de diâmetro, potencial zeta e influência do pH no potencial zeta por espalhamento de luz dinâmico (DLS) e a, distribuição e concentração de nanopartículas por analise de rastreamento de nanopartículas (NTA), porcentagem de eficiência de encapsulamento (EE%) por LC-MS/MS, morfologia por microscopia de força atômica (AFM) e microscopia eletrônica de transmissão (TEM), índice de recristalização por Calorimetria diferencial de varredura (DSC), avaliação da propriedade mucoadesivas por DLS. A citotoxidade do EA livre e encapsulado em NH foi avaliada pelo ensaio de resazurina (modelo 2D) e baseados em ATP (modelo 3D). Para ensaio em 2D foram utilizadas as linhagens de câncer de bexiga (T24 e RT4) com tratamentos de 24 h e 72h e fibroblastos de camundongos (3T3) com tratamento de 24h. Para o ensaio 3D foram utilizadas as células RT4 com tempo de tratamento de 24h. A internalização das nanopartículas foi avaliada por imagens de microscopia de confocal com varredura laser. Foi avaliado os níveis de expressão de proteínas pro e anti -apoptóticas por Western blot e PCR tempo real. Obteve-se NH-EA com tamanhos médios de 130,12 nm com índice de polidispersão de 0,224. Todas as nanopartículas apresentaram potencial zeta positivo indicando o seu revestimento pela quitosana. Este potencial é alterado com aumento do pH do meio. Por NTA foi confirmado a baixa polidispersão das NH-EA com concentração de partículas de 2,50 x 1012 partículas/mL. A EE% foi alta com 91,08% para SS e 88,35% para SM. NH-EA apresentou formato esférico com índice de recristalização de 36,58% indicando acomodação do EA nos espaços do núcleo lipídico. NH-EA demonstrou interação física com a mucina. As nanopartículas foram estáveis por 60 dias. O NH vazio não foi citotóxico. Já o EA no modelo 2D foi citotóxico tanto livre (IC50 de 5,08 µg/mL para T24 e 9,19 µg/mL para RT4) como encapsulado em NH (IC50 de 6,06 µg/mL para T24 e 8,5 µg/mL para RT4) após 24 h e 72h de tratamento. Por não ser sítio-específico o NH-EA apresentou baixa seletividade quando comparado com células 3T3. NH-EA, no modelo 3D, apresentou IC50 duas vezes menor do que o EA livre representando o potencial de internalização do nanocarreador híbrido nos esferoides. O NH-EA demonstrou atividade citotóxica com indução da apoptose pela via intrínseca e extrínseca nas células RT4. Desta forma, os resultados deste trabalho indicam que o NH desenvolvido foi adequado para encapsular o EA com alta eficiência de encapsulamento e estabilidade, com propriedade mucoadesiva que é relevante para a administração intravesical, além de proporcionar o aumento do efeito citotóxico frente as células de câncer de bexiga em modelos 2D e 3D.