Estudo da relação estrutura e função da melatonina no ciclo celular de parasitas Plasmodium falciparum 3D7 e nocaute para a quinase PfeIK1 e estudo funcional dos receptores serpentinos PfSR1 e PfSR10 em células de mamíferos. - Dias, Barbara Karina de Menezes (2022)
A melatonina, que contém em sua estrutura um anel indólico, desempenha um papel importante na manutenção da sincronização do ciclo intraeritrocítico do Plasmodium falciparum, parasita responsável pela forma mais severa da malária. Nesta tese investigamos o efeito de nove compostos indólicos sintéticos análogos a melatonina, no ciclo intraeritrocítico de parasitas P. falciparum selvagem, 3D7, e nocaute para a proteína quinase PfeIK1, que participa na via de sinalização desencadeada por melatonina em P. falciparum. Os resultados aqui obtidos indicam que oito dos nove compostos testados são capazes de impedir o crescimento dos parasitas, selvagem e nocaute, in vitro em concentrações micromolares. Os dados mostraram que o tratamento com o composto Melatotosil em concentração de nanomolar, é capaz de aumentar a parasitemia de forma similiar a melatonina em 3D7 mas não em PfeIK1- in vitro, e o tratamento em conjunto com a melatonina mostrou que o composto inibe o efeito do hormônio, atuando como um agonista parcial. Além, a adição do Melatotosil a parasitas PfGCaMP3 foi capaz de gerar um aumento na concentração de Ca2+ citosólico. Por outro lado, o composto Triptiofen apresentou maior atividade, apresentando menor valor de IC50 em ambas as cepas, e não apresentou citotoxicidade significativa em células HEK293, além de ter sido capaz de inibir o efeito da melatonina na parasitemia em 3D7. Nesta tese também investigamos a expressão heteróloga dos receptores SR1 e SR10 de P. falciparum em células de mamíferos, utilizando novas construções contendo HiBiT e SNAP no N-terminal dos receptores. Os resultados obtidos mostraram a expressão de ambos os receptores em células HEK293. Os resultados indicam ainda que o SR10 atua como uma chaperona do SR1, visto que a co-expressão dos receptores resulta em aumento da expressão total do SR1. Porém, apenas uma pequena taxa dos receptores expressos estão presentes na membrana celular. Além disso, utilizando a metodologia de nanoBRET entre as construções de HiBiT e SNAP, nós investigamos a interação entre SR1 e SR10 e os resultados obtidos sugerem uma potencial interação entre os receptores em células HEK293. Em adição, o efeito da melatonina na internalização dos receptores foi avaliado e os resultados sugerem um potencial efeito da melatonina na densidade de SR1 na membrana celular.