Parâmetros da imunidade inata celular e expressão gênica de metalotioneínas como biomarcadores de chumbo (Pb) no siri-azul Callinectes danae Smith, 1869. - Joviano, Willian Reina (2020)
Metais como o chumbo (Pb) podem constituir uma fonte de poluição ambiental difusa de difícil controle e remediação. Espécies cosmopolitas como os siris-azuis do gênero Callinectes sp. podem ser empregados para indicar a disponibilidade de contaminantes no ambiente. Diferentes autores verificaram a presença de metais em Callinectes sp., todavia, biomarcadores moleculares e imunológicos referentes à exposição destes metais tem recebido pouca atenção, principalmente para espécie-alvo deste estudo, o Callinectes danae . Diante disso, o presente trabalho teve por objetivo avaliar os efeitos deletérios do Pb na resposta imune celular e molecular em Callinectes danae. Para tanto, foi realizada caracterização dos hemócitos circulantes presentes na hemolinfa como parâmetro imunológico inicial; experimentos de exposição in vivo a 2 &#181 g/mL de Pb por 24h, 48h e 96h em indivíduos coletados em Cananéia, para avaliar parâmetros como: Quantificação total de Pb no hepatopâncreas, brânquias e músculos, por espectrômetro de absorção atômica; contagem diferencial de hemócitos por citometria de fluxo; contagem total de hemócitos em câmara de neubauer; viabilidade celular dos hemócitos circulantes e avaliação da expressão gênica de metalotioneínas (MTCu-II; MTCd-I e MTCd-II) por RT-qPCR no hepatopâncreas. Além disso, foram realizados experimentos in vitro e avaliado a atividade fagocítica após exposições a 0; 50; 100; 250; 500; 1000 ng/mL de Pb, por 1h, em siris-azuis coletados no complexo estuarino de Cananéia e na Baía do Araçá em São Sebastião. Os resultados demonstraram que a espécie alvo do presente estudo possui três populações de hemócitos, sendo estas: Granulócitos, semigranulócitos e hialinócitos. A contagem total e diferencial dos hemócitos variou consideravelmente entre os indivíduos, o que inviabilizou a utilização deste parametro como um biomarcador. Os ensaios de viabilidade celular apresentaram redução dos hemócitos vivos apenas em 96h de exposição. A bioacumulação de Pb foi estatisticamente significativa em todos tecidos amostrados, principalmente nas brânquias, onde houve aumento em 48h e redução em 96h. A expressão gênica de MTCu-II e MTCd-I não apresentaram diferenças nos períodos avaliados. Apenas MTCd-II foi regulada positivamente em 48h seguido de redução em 96h, indicando que a isoforma de metalotioneína a ser escolhida é uma variável a ser considerada e que possivelmente apenas esta isoforma consiga interagir com uma possível contaminação com Pb. Os experimentos de fagocitose in vitro apresentaram um curva decrescente com relação ao aumento das concentrações de Pb, em ambos locais de coleta, sugerindo uma resposta dose-dependente e demonstrando que a atividade fagocítica é uma forte candidata para posteriores estudos de monitoramento ambiental frente contaminações de Pb. Para tanto, mais estudos de aprofundamento nestes biomarcadores, diretamente no ambiente, devem ser conduzidos.