Estudo da citotoxicidade e mecanismo de ação de complexos de cobre(II) e da modulação da autofagia como oportunidades terapêuticas para tratar melanomas resistentes - Moraes Junior, Manoel Oliveira de (2025)
O presente trabalho foi dividido em dois capítulos. Capítulo I. O desenvolvimento de inibidores de BRAF (BRAFi, e.g. vemurafenibe) revolucionou o tratamento do melanoma, e mais tardiamente a combinação com inibidores de MEK. Mesmo com o sucesso inicial, pacientes sofrem do aparecimento de células resistentes que desemboca na recidiva dos tumores. Nesse contexto, podemos destacar o novos candidatos com potencial anticâncer, complexos de cobre(II) (CCu(II)) como o binuclear [Cu2(apyhist)2(dpam)]ClO4)4, para avaliar a citotoxicidade e mecanismo de ação em melanoma BRAFV600E parental e com fenótipo de resistência a BRAFi. Ensaios de viabilidade celular demonstraram efeito na faixa de micromolar, com maior potência em comparação sua variante CCu(II) mononuclear, cisplatina e dacarbazina em todas as linhagens testadas. Em ensaios funcionais, CCu(II) binuclear manifestou perfil antiproliferativo, anticlonogênico e anti-invasivo em modelo celular 2D e 3D de pele humana reconstruída. Como mecanismo de ação, CCu(II) binuclear induziu fragmentação de DNA, estresse oxidativo e disfunção mitocondrial. Esses eventos resultaram na ativação de múltiplas vias de morte programada, com o recrutamento de marcadores de necroptose (aumento de p-MLKL), ferroptose (inibição de GPX4) e autofagia (lipidação de LC3B) em células parentais, e de ferroptose e autofagia em células resistentes. Dessa forma, resultados revelaram citotoxicidade induzida por CCu(II) binuclear destacando mecanismos distintos e vulnerabilidades exploráveis no melanoma resistente a BRAFi, além de corroborarem o desenvolvimento de novas moléculas à base de cobre como alternativas promissoras para superar fenótipos de resistência no melanoma. Capítulo II. O melanoma acral (AM) é um subtipo raro que não apresenta perfil de mutação genética semelhante a outros tipos comuns de melanoma e, consequentemente, não respondem com o mesmo sucesso às terapias-alvo (BRAFi e MEKi). Recentemente, identificou-se alto número de pacientes com o perfil genético aberrante na via de controle de ciclo CDK4/6, abrindo portas para o uso de inibidores na clínica (e.g. palbociclibe). No entanto, em ensaios clínicos os pacientes não se beneficiaram da inibição de CDK4/6 como esperado. Identificou-se, posteriormente, a hiperativação de ERK como um dos principais fatores da resistência intrínseca/adquirida ao CDK4/6i, além de outras alterações metabólicas. Visto que a modulação da autofagia é um mecanismo de resistência em melanoma e já foi reportada sua relação após tratamento com CDK4/6i em outros tipos de câncer, analisamos a atividade autofágica, e sua inibição, mediante tratamento com palbociclibe em células de AM. Os resultados demonstram que o AM parental tratado com palbociclibe induziu o processo de autofagia via lipidação de LC3, incluindo a manutenção dessa sinalização em células resistentes ao CDK4/6. Ademais, a inibição da autofagia com cloroquina resultou em atividade antiproliferativa e indução da apoptose quando combinado ao palbociclibe, sobretudo em AM parental. Contudo, AM resistentes ao palbociclibe não foram sensíveis a cloroquina na mesma extensão que o AM parental, demonstrando na resistência adquirida, outros fenótipos têm papel importante na sustentação da sobrevivência e bloqueio de morte.