Caracterização de novos componentes moleculares da fagocitose associada à LC3 (LAP) em macrófagos - Alves, Carolina Bifano de Assis (2025)
Macrófagos são células do sistema imunológico inato capazes de reconhecer e fagocitar uma ampla variedade de alvos, contribuindo por esse processo para funções primordiais como manutenção da homeostasia e controle das infecções. Durante a fagocitose induzida pela ativação de certos receptores, pode ocorrer a conjugação de proteínas autofágicas da família ATG8, como LC3, na membrana simples do fagossomo, processo conhecido como a fagocitose associada à LC3 (LAP). LAP modula a resposta de macrófagos frente a estímulos como patógenos, imunocomplexos e células mortas. A proteína Rubicon (RUBCN) desempenha um papel essencial em LAP, associado a geração de fosfatidil-inositol-3-fosfato (PI3P) e a produção de espécies reativas de oxigênio (ROS) intrafagosomal, dois eventos-chave na via. O objetivo deste estudo é caracterizar novos componentes da via de LAP, identificados previamente em uma varredura proteômica baseada em biotinilação por proximidade (Turbo-ID) de alvos que interagem com RUBCN. Especificamente, avaliamos o possível papel de SH2 Domain-Containing Inositol 5\'-Phosphatase 1 (SHIP-1), uma inositol fosfatase, e Voltage-dependent anion channel 2 (VDAC2), um canal transportador presente na membrana externa de mitocôndrias. Para isso, caracterizamos primeiramente uma abordagem de depleção in vitro de SHIP-1 e VDAC2 em macrófagos primários e imortalizados derivados de medula óssea (BMDM), utilizando a técnica de CRISPR/Cas9. Por ensaios de microscopia confocal e immunoblot, demonstramos que SHIP-1 e VDAC2 são requeridos para a lipidação de LC3. Particularmente, encontramos que VDAC2 se localiza no fagossomo durante LAP, e a sua depleção reduziu o recrutamento de diversos componentes da cascata de sinalização de LAP para o fagossomo. Portanto, nossos dados sugerem que SHIP-1 e VDAC2 são fortes candidatos para componentes ou reguladores da via de LAP.