Identificação de fatores de transcrição com potencial de alvo terapêutico em células infectadas por diferentes sublinhagens de HPV-18 e -16 - Nunes, Valéria Talpe (2024)
A infecção persistente por papilomavírus humanos (HPV) de alto risco oncogênico está associada com o desenvolvimento do câncer da cérvice uterina, e de regiões anogenitais como vulva, vagina, pênis, ânus, além da orofaringe. Diversos fatores de transcrição celulares (FTs) se ligam à LCR viral e são capazes de regular a atividade transcricional dos HPV, modulando a expressão das regiões abertas de leitura (ORF) E6 e E7 que codificam as principais oncoproteínas que interagem com diversas vias celulares de forma a induzir um ambiente celular favorável ao vírus e possivelmente tumorigênico. Dada a importância dos sítios de ligação de FTs celulares na LCR, a variabilidade genética encontrada nesta região entre os HPV-16 e HPV-18 pode ser um importante fator que contribui para diferenças no potencial oncogênico reportado entre diferentes tipos e sublinhagens de HPV. Assim, avaliamos o impacto de mais de 500 FTs humanos sobre a atividade transcricional do promotor precoce de HPV-16 (P97) e HPV-18 (P105), realizando um ensaio de expressão dupla de luciferase. Foram transfectadas células C33A com plasmídeos de expressão de cDNA dos FTs e constructos contendo a região completa da LCR e o promotor precoce dos diferentes HPV e sublinhagens a montante do gene da luciferase de vagalume. A luciferase de renilla foi utilizada como normalizador do ensaio. No total, foram identificados 130 FTs com impacto diferencial sobre a atividade transcricional dos HPV-16 e HPV-18, e entre esses, 70 FTs apresentaram um impacto maior ou menor do que duas vezes em comparação à atividade basal do promotor precoce. Análises in sílico de predição de sítios putativos revelaram que 27 FTs poderiam se ligar diretamente à LCR dos HPV-16 e -18. Entre esses, foram selecionados seis FTs para os ensaios de validação: HOXB13, NR2E1, c-MYB, GATA3, FOXO1 e TBX21 de forma a confirmar-se ou não o impacto desses FTs sobre a atividade transcricional dos HPV-16 e -18. Os FTs identificados no estudo podem levar a novos alvos terapêuticos para o tratamento de tumores causados por HPV de alto risco, além de aprofundar o conhecimento dos mecanismos moleculares da regulação da transcrição viral