Estudo comparativo entre o metabolismo oxidativo de leucócitos polimorfonucleares obtidos por sedimentação espontânea, por sedimentação em gradiente de densidade e presentes no sangue total - Rebecchi, Ivanise Marina Moretti (1997)
Neutrófilos polimorfonucleares (PMN) têm um importante papel na defesa do hospedeiro contra infecções. Estas células produzem grande quantidade de espécies reativas de oxigênio (especialmente, O2·- e H2O2) com atividade microbicida. Muitos estudos in vitro têm sido usados para estimar a produção de espécies reativas in vivo. Nestes estudos PMN isolados de sangue periférico por gradientes de densidade (gradiente de Ficoll-Hypaque e sedimentação em dextran) são comumente usados. Este método resulta na obtenção de alta homogeneidade celular, entretanto, leva a prévia ativação celular devido a perturbações na membrana. Neste trabalho foi comparada a produção de espécies reativas de oxigênio por PMN obtidos por gradiente de densidade (1x105cels/ml) com PMN obtidos por sedimentação espontânea (2x105cels/ml) ou presentes no sangue sem qualquer manipulação. Embora o processo de sedimentação espontânea não leve a uma população celular homogênea, é suposto que preserve as células de estimulação durante o isolamento. A produção de O2·- e a ativação do sistema H2O2/MPO foi monitorada respectivamente por quimluminescência dependente de lucigenina (2,5x105M) e luminol (1x105M). A produção de O2·- foi também monitorada pela redução do citocromo c. A produção de O2·- e a ativação do sistema H2O2/MPO foram maiores para as células isoladas por gradiente de densidade com ou sem qualquer estimulação (2,5 mg/ml de zymosan opsonizado, 50 ng/ml de acetato de forbol miristato e 4x106M de formilmetionil-leucil-fenilalanina). Adicionalmente a liberação de MPO foi significantemente maior para as células obtidas por gradiente de densidade quando comparadas às células obtidas por sedimentação espontânea. Os amplificadores clássicos da reação HRP/H2O2/luminol parecem ser ineficientes para as reações do sistema MPO/H2O2/luminol. A razão para esta ausência de amplificação deverá ser elucidada em estudos posteriores. Este trabalho mostra claramente que os processos de obtenção de PMN devem afetar respostas celulares importantes, contribuindo para alguns erros de interpretação de resultados obtidos in vitro.