Ensaio para a produção de anticorpos de cadeia simples, do tipo VHH, como potencial ferramenta para a neutralização dos efeitos de fase aguda ocasionados por infecção do vírus Zika (ZIKV) - Araujo, Luiz Felipe Lemes de (2020)
O vírus Zika (ZIKV) é um arbovírus responsável por inúmeros distúrbios, tal como, a síndrome de Guillain-Barré e defeitos congênitos em fetos, como microcefalia e aborto espontâneo. Apesar de um intenso aumento nas pesquisas relacionada ao vírus, nenhuma vacina ou tratamento está disponível. Camelídeos, produzem uma fração de anticorpos IgG funcionais desprovidos de cadeia leve e do primeiro domínio constante, os quais as regiões de ligação ao antígeno são denominadas VHHs. Tais anticorpos estão se mostrando a base de uma nova geração de ferramentas para diagnóstico e terapias. Assim, o presente estudo teve como objetivo a produção de anticorpos de cadeia simples, do tipo VHH, potencialmente neutralizantes como estratégia terapêutica para infecção por ZIKV. Para isso, foi realizado um levantamento de epítopos em regiões conservadas da proteína envelope (E) do ZIKV que são alvos de anticorpos neutralizantes e se encontram expostas sobre a superfície do vírus. As análises apontam para uma epítopo conservado localizado no domínio II da proteína E do ZIKV, que foi avaliado por dinâmica molecular complexado com com um anticorpo neutralizante apresentando baixas flutuações. Posteriormente a proteína recombinante contendo o epítopo foi expressa utilizando a cepa SHuflle e purificada em coluna HiTrap FF Crude (GE Healthcare), utilizando o sistema ÄKTA (GE Healthcare). A estrutura secundária da proteína recombinante foi determinada por dicroísmo circular, apresentando as estruturas preditas. Através de ELISA foi demonstrado a capacidade do soro de indivíduos infectados com ZIKV de reconhecer a proteína recombinante. Quando avaliada a capacidade da proteína recombinante em elicitar anticorpos neutralizantes em camundongos Balb/c, a mesma se apresentou sugestiva de neutralização. A partir da imunização de Lamas glamas foi possível obter uma biblioteca gênica de anticorpos VHH. Assim, foi possível expressar uma proteína recombinante do ZIKV em sua estrutura secundária e gerar uma biblioteca gênica de anticorpos VHH que poderá ser utilizada para desenvolvimento de terapias, vacinas e diagnósticos.