Avaliação da Imunogenicidade de peptídeos derivados de Catepsina L-like de Leishmania infantum em modelo murino - Silva, Ryan Emiliano da (2022)
As espécies do gênero Leishmania parasitam mamíferos em todo o mundo e possuem ciclos de vida com alternância entre hospedeiros vertebrados e invertebrados, sendo que a Leishmania infantum é o agente etiológico da manifestação visceral da leishmaniose. Parte da elevada patogenicidade do protozoário se justifica pela ação catalítica de catepsina L-like, uma cisteíno- protease que participa de uma variedade de processos metabólicos e regulatórios, além de importante mediação nos processos de patogenia e virulência, dentre os quais se destacam a evasão da resposta imune do hospedeiro, diferenciação celular, colonização e invasão de células, transposição de barreiras teciduais, degradação de proteínas hematopoiéticas, ativação de respostas inflamatórias e morte celular programada. Assim, este projeto teve como objetivo metodológico a caracterização in silico de catepsina L-like nos isolados brasileiros de L. infantum, bem como a proposição de fragmentos peptídicos conjugados a carreadores proteicos para imunização de modelos murinos, de modo a avaliar parâmetros de inocuidade e imunogenicidade. As sequências gênicas de catepsina L-like não demonstraram variabilidade intraespecífica, o que se refletiu na proposição de sequências proteicas de caráter consensual. A sequência primária de 354 resíduos demonstrou possuir um pI teórico de 6,69, a presença de três sítios catalíticos, e um caráter hidrofílico e termoestável. A sequência terciária demonstrou a presença de dois domínios proteicos, intercalados por uma região livre com ausência de motivos conhecidos. Com base nestas variáveis bioquímicas e estruturais, se elegeu uma sequência de 12 aminoácidos que correspondeu ao peptídeo 01. Este sofreu uma adição terminal de cisteína acoplada ao carreador Blue carrier protein, de modo a corresponder ao peptídeo 02. Quando estes peptídeos foram utilizados para imunizar camundongos isogênicos BALB/c, não se observou nenhuma resposta colateral, o que atestou a inocuidade dos peptídeos. As amostras séricas dos animais imunizados com estes segmentos peptídicos não demonstraram reatividade nos ensaios de imunofluorescência. Contudo, quando as amostras séricas foram testadas através de ensaios imunoenzimáticos, foi observado um crescimento no valor de absorbância encontrado no grupo imunizado com o peptídeo 01 em relação aos animais imunizados com PBS, o que sugere um eventual potencial imunorreativo deste segmento. Assim, o estudo conclui que estes peptídeos derivados de catepsina L-like de L. infantum demonstram razoável potencial imunogênico, propondo a combinação futura com outras moléculas adjuvantes, de modo a atingir formulações que eventualmente potencializem o caráter imunoestimulante desta molécula. Desse modo, o trabalho contribui com a consolidação de uma metodologia de investigação in silico de segmentos com potencial imunogênico. Além disso, fornece um embasamento para iniciativas posteriores que se disponham a melhorar o perfil de imunorreatividade, voltado tanto para prospecção de substratos antigênicos para padronização de metodologias sorológicas com acurácia diagnóstica, quanto para ensaios de rastreio de antígenos vacinais.