Superóxido dismutase e diidroorotato desidrogenase de Neospora caninum: potenciais alvos terapêuticos - Abreu Filho, Pericles Gama (2025)
A presente pesquisa focou em duas enzimas-chave de Neospora caninum (N. caninum), um parasita intracelular obrigatório do filo Apicomplexa que causa impactos veterinários e econômicos significativos. Nesse estudo as enzimas Dihidroorotato Desidrogenase (NcDHODH) e Superóxido Dismutase 2 (NcSOD2) de N. caninum foram caracterizadas. Ambas as enzimas são exploradas visando seu uso como potenciais alvos terapêuticos para a neosporose, uma doença para a qual atualmente não há tratamento específico. A NcDHODH, uma enzima crucial na biossíntese de pirimidinas, foi investigada utilizando uma abordagem integrada que combina análise in silico, modelagem por homologia, expressão heteróloga em E. coli e localização da proteína nativa no parasita. A modelagem por homologia, utilizando estruturas da DHODH de Plasmodium falciparum e Eimeria tenella, destacou semelhanças no barril catalítico, mas diferenças no domínio N-terminal, que é crítico para interações com inibidores. A NcDHODH foi expressa com sucesso em E. coli, purificada e utilizada para gerar anticorpos policlonais em camundongos. Esses anticorpos detectaram a NcDHODH nativa em taquizoítos de N. caninum, localizando-a no citoplasma e nas mitocôndrias, e identificaram duas bandas (~50 kDa e ~45 kDa) correspondentes a diferentes formas da enzima. Paralelamente, a NcSOD2, uma enzima antioxidante que converte ânions superóxido em oxigênio molecular e peróxido de hidrogênio, foi caracterizada molecularmente e alguns parâmetros bioquímicos investigados. A NcSOD2 foi clonada, expressa em E. coli e purificada, revelando quatro bandas distintas correspondentes às formas monomérica, dimérica, trimérica e tetramérica, confirmadas por espectrometria de massa. Anticorpos policlonais gerados em camundongos detectaram uma banda de ~32 kDa em extratos proteicos de taquizoítos de N. caninum, consistente com o peso molecular previsto, além de um dímero e uma forma clivada mitocondrial. Ensaios de imunofluorescência co-localizaram a NcSOD2 com as mitocôndrias nos taquizoítos. A caracterização bioquímica mostrou atividade enzimática ótima e estabilidade em pH 8,0 e 35°C, sem melhora significativa na presença dos íons testados. Juntos, esses estudos fornecem informações valiosas sobre os papéis estruturais e funcionais da NcDHODH e da NcSOD2 respectivamente em N. caninum, destacando seu potencial como alvos terapêuticos. Os resultados estabelecem as bases para pesquisas futuras, incluindo testes de inibidores e uma exploração mais aprofundada dos mecanismos redox e das defesas antioxidantes do parasita, abrindo caminho para o desenvolvimento de drogas anti-apicomplexas específicas para a espécie.