Influência de diferentes fontes de carbono e nitrogênio na produção do antitumoral retamicina por Streptomyces olindensis ICB20. - Guimarães, Luciana Maria (2005)
O objetivo desta tese de Doutorado foi o estudo da influência de diferentes fontes de carbono e de nitrogênio na produção do antibiótico retamicina em cultivos descontínuos de Streptomyces olindensis ICB20 utilizando-se planejamento experimental para delineamento dos cultivos realizados. Foram realizados cultivos em incubador rotativo, utilizando Quadrado Latino para a definição dos melhores pares de fontes de carbono e nitrogênio para o crescimento celular e produção de retamicina. As fontes de carbono estudadas foram: glicose, maltose, amido e glicerol e as fontes de nitrogênio foram: sulfato de amônio, nitrato de sódio, extrato de levedura e Samprosoy® (proteínas isoladas de soja). Como condições de cultivo em incubador rotativo, foram utilizados 200 rpm de agitação e 30°C de temperatura. De acordo com os resultados obtidos e com base nas análises estatísticas efetuadas, os melhores pares de fontes escolhidos foram: glicose e extrato de levedura para o crescimento celular e amido e nitrato de sódio para a produção de retamicina. Posteriormente, foi utilizado projeto fatorial simples 2² para estudar a influência da concentração dos pares de fontes escolhidos na etapa anterior, no crescimento celular e na produção de retamicina em cultivos em biorreator. Foram utilizados biorreatores de bancada de 15 L de capacidade, com volume útil de 10 L, mantendo-se fixas as seguintes condições: 500 rpm de agitação, 1vvm de aeração, pH 7,0 e 30°C. As análisesestatísticas demonstraram que as melhores concentrações estudadas foram: 10 g/L de glicose e 100 mM de extrato de levedura (100 mM em termos de nitrogênio total) para formação de células e 10 g/L de amido e 100 mM de nitrato de sódio (100 mM em termos de nitrogênio total) para produção de retamicina total. ) Um cultivo descontínuo em duas etapas foi realizado também em biorreator, mantendo-se as mesmas condições de cultivos fixas, sendo que na primeira etapa foram utilizados glicose e extrato de levedura para favorecimento do crescimento celular e, na segunda etapa foi adicionado um meio de cultivo contendo amido e nitrato de sódio para favorecimento da produção do antitumoral. A estratégia utilizada neste cultivo mostrou-se interessante, e altamente promissora, uma vez que os resultados obtidos superaram os resultados anteriores, tanto em termos de produção total de retamicina quanto em termos de produtividade e produção específica. Foram também testados neste trabalho, novos métodos para a determinação da retamicina, tais como, espectrofotometria de varredura e cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) e, ainda, foram testados métodos para comprovar a atividade biológica da retamicina, como testes de atividade antimicrobiana e atividade antitumoral.