O papel das isoformas de HJURP (Holliday Junction Recognition Protein) em células de glioma - Storti, Camila Baldin (2025)
A HJURP é responsável pela deposição de CENP-A nos centrômeros, garantindo a estabilidade genômica e a segregação cromossômica. Adicionalmente, HJURP promove o relaxamento da cromatina nas regiões de quebras de DNA, facilitando o reparo das lesões. HJURP foi amplamente relacionada à progressão de diversos tipos de tumores, incluindo gliomas. No entanto, todas as funções descritas foram baseadas na isoforma HJURP-A, codificada pelo transcrito HJURP-1. Porém, existem sequências de cDNA depositadas no GenBank que indicam a existência de HJURP-2 e HJURP-3, que codificam HJURP-B e HJURP-C, respectivamente. Essas isoformas preservam os domínios funcionais descritos para HJURP-A, mas com exclusão de trechos contendo sítios de fosforilação potencialmente associados à resposta ao dano no DNA. Assim, neste trabalho investigamos as especificidades funcionais e o envolvimento das isoformas nas competências das células tumorais. Inicialmente, validamos a expressão dessas variantes de HJURP nas linhagens de glioma e verificamos que há um switch de expressão entre os diferentes transcritos de HJURP durante a progressão dos gliomas e outros tumores. HJURP-3 foi o transcrito predominante em tecidos normais, enquanto que HJURP-1 foi o mais abundante nas amostras tumorais. Observamos também que a expressão diferencial das isoformas de HJURP na progressão tumoral impacta significativamente o prognóstico dos pacientes. A expressão elevada de HJURP-3 está associada a melhores prognósticos em pacientes com gliomas, em contraste com HJURP-1, cuja expressão elevada está correlacionada a piores prognósticos. Esse resultado sugere que a quantificação dos transcritos de HJURP pode se tornar uma ferramenta valiosa para a determinação do prognóstico de pacientes com gliomas, e, possivelmente, de outros tipos de tumores. Prosseguimos com estudos funcionais de superexpressão das isoformas de HJURP em células de glioma e observamos que HJURP-B e HJURP-C promovem crescimento celular in vitro e migração, assim como já havia sido demonstrado para HJURP-A. Investigamos ainda o possível envolvimento dessas isoformas em vias de reparo de DNA. HJURP-B e HJURP-C mostraram atividade na via HR, pois ambas as isoformas contribuíram para o recrutamento de RAD51 às áreas de lesão e promoveram resistência ao TMZ. No entanto, observamos divergências entre as funções de HJURP-A e HJURP-C, quanto à capacidade de reparo de DSBs pela via NHEJ e à promoção de radiorresistência. Embora HJURP-A apresente estas competências, HJURP-C não participou da resolução de focos de 53BP1 induzidos por radiação, não promoveu radiorresistência e não apresentou relação com a resposta dos pacientes à radioterapia. Interessantemente, HJURP-C é a única das isoformas que não possui o sítio de fosforilação para CDK5, sugerindo uma importância funcional deste sítio para a atividade da HJURP no reparo de DSB pela via NHEJ. Portanto, este estudo foi pioneiro na identificação de HJURP-1 como sendo o transcrito do locus predominante na progressão do câncer, o que está de acordo com a atividade de HJURP-A na facilitação do reparo de DSBs, enquanto a HJURP-C é mais abundante em tecidos não tumorais e não preserva integralmente a função de reparo de DNA. Essas descobertas trazem importantes implicações clínicas, destacando o potencial para o desenvolvimento de terapias direcionadas especificamente ao transcrito HJURP-1.