Estudos espectroscópicos das interações da hemoglobina extracelular de Glossoscolex paulistus com detergentes iônicos - Gelamo, Emerson Luiz (1999)
A hemoglobina extracelular de Glosssoscolex paulistus é uma proteína oligomérica constituída por uma grande quantidade de subunidades de pesos moleculares entre 12kDa a 15kDa e em torno de 29kDa, que conferem à proteína um peso molecular de 3MDa. Neste trabalho, as técnicas espectroscópicas de absorção ótica, fluorescência e dicroísmo circular foram utilizadas para monitorar as mudanças produzidas na estrutura da hemoglobina, na interação com detergentes iônicos, como dodecil sulfato de sódio (SOS), N-hexadecil-N,N-dimetil-3-amônio-1-propano sultanato (HPS) e cloreto de cetiltrimetilamônio (CTAC). Para a hemoglobina nas formas oxi, meta e ciano-meta, os resultados da técnica de fluorescência mostraram que na presença dos detergentes, há um aumento do rendimento quântico dos triptofanos, sendo que o maior aumento é verificado na interação da oxi hemoglobina com o detergente catiônico CTAC, sugerindo que a proteína apresenta uma quantidade maior de sítios aniônicos. Um efeito intermediário é verificado para o HPS um efeito menor para o SOS. Desta técnica foram obtidas ainda, as constantes de associação dos detergentes à hemoglobina e as constantes de supressão de Stern-Volmer por acrilamida na presença de quantidades diferentes de detergentes, que refletem o grau de exposição dos resíduos de triptofano presentes na matriz da proteína. Da técnica de dicroísmo circular, observou-se que na interação da hemoglobina com CTAC, em concentrações iniciais de detergente, ocorreu uma perda da estrutura secundária, seguida de recuperação para concentrações maiores de detergente. Outras três proteínas foram utilizadas como padrão de comparação: albumina sérica bovina (BSA), albumina sérica humana (HSA) e citocromo c. As albuminas foram escolhidas por se tratarem de proteínas muito utilizadas no estudo da interação com detergentes do ponto de vista físico químico. A fluorescência verificada para as albuminas apresentou um comportamento diferente do verificado para a hemoglobina , sendo interpretado como sendo devido às modificações induzidas pelos detergentes nas estruturas destas proteínas, e também pelo aumento da hidrofobicidade nas regiões próximas ao resíduo de triptofano. O HPS praticamente não altera a estrutura destas proteínas e o SOS induz perda na estrutura secundária. No caso das albuminas , a estrutura secundária não é recuperada à medida em que se aumenta a quantidade de detergente em solução. O citocromo c foi escolhido por tratar-se de uma hemoproteína monomérica, e portanto, mais simples que a hemoglobina. As propriedades de emissão desta proteína na presença de SOS e CTAC sofre mudanças similares às da hemoglobina, porém os espectros de dicroísmo circular revelam que o CTAC interfere menos que o SOS na sua estrutura secundária.