Caracterização das células proliferativas em ratos em desenvolvimento e adultos após o desmame precoce. - Rattes, Isadora Campos (2023)
Células proliferativas são encontradas por toda glândula durante o desenvolvimento pós-natal do rato e, após o desmame, estão concentradas na região do istmo e do colo. Nos animais adultos, um nicho adicional é encontrado também na base da glândula, mas a caracterização de marcadores para células-tronco/proliferativas ainda é discutida na literatura e pouco se sabe sobre a atividade dessas células durante o desenvolvimento pós-natal. Desconhece-se a organização do ambiente, em termos de fatores de crescimento e sinalização, e como o padrão de alimentação pode afetar esses elementos e influenciar a maturação da glândula. O período de amamentação é crítico para a maturação do estômago em termos de fornecimento de nutrientes e fatores de crescimento, e a interrupção abrupta do aleitamento materno pode ser prejudicial ao desenvolvimento do órgão. Assim, nossa hipótese de estudo foi de que a mudança abrupta de dieta com desmame precoce acarretaria perturbações nos nichos proliferativos que poderiam se estender até a vida adulta. Nosso objetivo foi avaliar: como o desmame precoce regula a atividade proliferativa em termos de distribuição e dinâmica de cinética celular; a expressão de genes importantes na regulação dos nichos proliferativos, e a presença de Troy (marcador de célula-tronco) nas populações que compõe o epitélio gástrico de ratos. No 15º dia, filhotes de ratos Wistar foram divididos em dois grupos: amamentado (A) e desmame precoce (DP). Os animais A permaneceram com suas mães e foram amamentados até o 21º dia (desmame no biotério). Já os animais DP foram separados de suas mães e mantidos em outra gaiola, onde a dieta passou a ser uma pasta de ração hidratada. Amostras da mucosa gástrica foram coletadas aos 15, 18, 30, 60 e 120 dias para análises de morfologia, expressão gênica por RT-qPCR e níveis proteicos por imuno-histoquímica e Western Blot. Os resultados indicaram uma distribuição distinta de células proliferativas Ki-67+ entre os A e DP de 18 dias, os quais apresentaram um perfil semelhante ao dos adultos. Além disso, o DP acarretou um aumento da proliferação na base da glândula nos animais de 60 dias, mas não observamos diferenças aos 120 dias. A dinâmica de crescimento da glândula varia com o avanço da idade após o DP, e a cinética celular foi estudada por incorporação de BrdU e EdU. A distribuição de células BrdU+, EdU+ e BrdU/EdU+ variou entre A e DP e ao longo das idades, indicando efeitos específicos do DP sobre a entrada no ciclo celular. Em relação a expressão gênica, o DP diminuiu Wnt3, Notch1, Notch2, e aumentou Bmp2 aos 18 dias. Já aos 60 dias, o DP aumentou Axin2, Notch1 e Notch2, sem diferenças aos 120 dias. Por meio de análise in silico observamos que componentes das vias Notch, BMP, Wnt e SHH são diferentemente expressos nas células zimogênicas e parietais. Quanto às células Notch1+ o DP diminuiu a marcação aos 60 dias, enquanto células Notch2+ aumentaram no istmo e diminuíram na base aos 60 dias. Quanto à distribuição de Troy durante o desenvolvimento pós-natal, constatamos que do 3º ao 15º dia, o número de células Troy+ não varia, mas a partir do 18º dia essa população aumenta. Em níveis proteicos, o DP aumentou Troy aos 18 dias, mas aos 60 dias ocorre uma inversão com a diminuição desses níveis. Concluímos que o desmame precoce promove em efeitos imediatos e tardios na distribuição de células proliferativas na glândula gástrica, afeta a entrada de células em ciclo celular e a expressão de marcadores de célula-tronco, modulando genes importantes nas vias de regulação dos nichos proliferativos.