Análise funcional \"in vivo\" da porção intracelular do produto protéico do locus roughest de Drosophila melanogaster por transformação mediada por elemento P

• Ano de defesa: 2005
• Autor(a) principal: Almeida, Lucilene de
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: Drosophila melanogaster; Não informado.; Retina; Roughest; Transgênico
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17136/tde-04022025-115423/

A família IRM (Irre Recognition Module) é um subgrupo filogenéticamente conservado de proteínas de adesão da superfamília das imunoglobulinas, a qual inclui os produtos dos loci hibris (hbs) stick and Stones (sns) e os parálogos roughest (rst) and kin of irre (kirre) em Drosophila melanogaster bem como as proteínas SYG de C. elegans e Nefrina e Neph de mamíferos. rst é um gene pleiotrópico que está envolvido em vários processos do desenvolvimento embrionário e pós embrionário de Drosophila, tais como desenvolvimento da musculatura embrionária, direcionamento axonal, histólise das glândulas salivares e diferenciação das células pigmentares durante o processo final do desenvolvimento do olho. O locus rst codifica uma proteína transmembrana unipasso com cinco domínios semelhantes àqueles de imunoglobulina na sua porção extracelular e uma longa cauda citoplasmática rica em serina e treonina contendo vários sub domínios potencialmente importantes do ponto de vista funcional. A proteína Rst é dinamicamente expressa durante a embriogênese, nos estágios larvais tardios e pupais e parece atuar tanto como uma molécula de adesão quanto de sinalização. No olho composto, a distribuição precisa e regulada da proteína Rst, no espaço e tempo, é essencial para a correta diferenciação das células pigmentares secundárias e terciárias e para a eliminação das células interomatidiais em excesso. Com a intenção de estudar \"in vivo\" a função de alguns destes domínios, diversas versões truncadas do cDNA rst contendo regiões progressivamente menores do domínio intracelular da proteína, previamente construídas em nosso laboratório foram microinjetadas em embriões de Drosophila melanogaster, através da técnica de transformação mediada por Elemento P. Estas construções foram integradas estavelmente na linhagem germinativa de Drosophila melanogaster. Uma das construções, pGMR18Z, a qual codifica uma proteína truncada, que elimina a seqüência consenso putativa reconhecida por proteínas com domínio PDZ (X-Ser/Thr-X-Val-COO-), apresentou um fenótipo de olho rugoso com desorganização das omatídias e num plano mais basal, compactação dos possíveis fotorreceptores, sugerindo que o complexo protéico necessário para o ancoramento ao citoesqueleto, para a montagem do complexo juncional, não foi recrutado, formando dessa maneira uma adesão célula-célula ineficiente, porém suficiente para compactar estruturas celulares, já que esta possui o domínio transmembranar, numa região onde esta proteína não deveria estar presente naquele período do desenvolvimento. As demais construções, pCa18Z/Δ1, pCa18Z/Δ2, pCa18Z/Δ3, pGMR 1.2E e pGMR st, não apresentaram alterações fenotípicas de olho nos indivíduos analisados. No caso do fenótipo de olho rugoso apresentado pelo transgênico pGMR18Z pode-se especular que este seja devido à falta da seqüência consenso putativa reconhecida por proteínas com domínio PDZ, já que este foi o único domínio retirado da proteína Rst. Em conjunto, os resultados obtidos contribuíram para o entendimento do papel desempenhado pelos diversos domínios da proteína Rst, na formação da estrutura altamente organizada que caracteriza o olho composto de Drosophila melanogaster.