Correlação entre o perfil proteômico e histologia testicular de pacientes com azoospermia não obstrutiva - Rodrigues, Mayara (2025)
Introdução: A azoospermia não obstrutiva (NOA) é a forma mais severa de infertilidade masculina, caracterizada pela ausência de espermatozoides no ejaculado devido a falhas na espermatogênese. Considerando a heterogeneidade do parênquima testicular, a produção de espermatozoides pode ocorrer de forma focal. Para identificar a presença de espermatozoides em diferentes regiões do testículo, foi proposto o mapeamento testicular percutâneo com aspiração por agulha fina (FNA). Este procedimento pode ser utilizado para diagnosticar a causa da azoospermia, direcionar a adequada utilização das técnicas de extração de espermatozoides e análise do microambiente testicular por meio da avaliação do perfil proteômico. Objetivos: Comparar a histologia e perfil proteômico de amostras obtidas por FNA de pacientes com NOA. Métodos: Estudo prospectivo que incluiu 10 participantes de pesquisa diagnosticados com NOA, submetidos ao mapeamento testicular no Centro de Reprodução Humana do HCFMUSP. Dados hormonais, incluindo os níveis séricos de testosterona total, FSH, LH, prolactina, estradiol e SHBG foram coletados e analisados. As amostras obtidas durante a FNA foram classificadas, com base na análise histológica, nos grupos de insuficiência germinativa severa (IGS), parada de maturação (PM) e hipoespermatogênese (HSPG). Para análise proteômica, as proteínas extraídas foram quantificadas e analisadas por espectrometria de massa (LC-MS/MS). Foi utilizado o teste t de Student, pelo SPSS®, para a análise estatística dos dados de volume testicular e avaliação hormonal, considerando p<0,05 como significativo. O software Perseus foi utilizado para a Análise de Componentes Principais (PCA) e avaliação do perfil proteômico. Para identificar proteínas diferencialmente reguladas, foi aplicada uma análise univariada do tipo ANOVA, seguida pela correção de Benjamini-Hochberg, com um valor de p<0,05 considerado significativo. Resultados: As análises hormonais não demonstraram diferenças significativas entre os pacientes com e sem presença de espermatozoides no testículo. Foram identificadas 983 proteínas, sendo 154 diferenciamente expressas entre HSPG e IGS. No grupo HSPG, proteínas associadas à manutenção genômica, como UBE2N e OTUB1, apresentaram maior abundância, sugerindo uma maior preservação funcional. Em contraste, no grupo IGS, proteínas relacionadas ao estresse metabólico e colapso estrutural, como MYH9 e APOE, foram mais abundantes. O estresse oxidativo foi identificado como fator crítico, com PARP1 mais abundante no grupo HSPG, sugerindo maior capacidade de reparo ao DNA. Já no grupo PM, que representa uma condição intermediária na falha da espermatogênese, foram identificadas 43 proteínas com diferenças siginificativas entre PM e IGS e 21 em relação a HSPG. Conslusão: A avaliação do perfil proteômico apresentou diferença estatística em vias moleculares críticas para a manutenção da homeostase testicular e a regulação epigenética entre os grupos de PM e IGS. Alem disso, foi possível observar proteinas que estão hipo e hiper representadas em cada grupo, fornecendo potenciais biomarcadores para infertilidade associada à NOA. Estes achados aprimoram a compreensão dos mecanismos associados à espermatogênese e oferecem novas perspectivas para estratégias diagnósticas e terapêuticas em infertilidade masculina