6,7-diidroxi-3-[3\',4\'-metilenodioxifenil]-cumarina, livre ou lipossomal, imunomodula funções efetoras de neutrófilos periféricos isolados de pacientes com artrite reumatoide e estimulados via receptores Fc gama e CR - Albiero, Lucinéia Reuse (2017)
A ativação de neutrófilos desencadeia os processos de fagocitose, metabolismo oxidativo, desgranulação, e formação e liberação de neutrophil extracellular traps (NETs), que atuam em conjunto na eliminação dos agentes infecciosos. Entretanto, em doenças autoimunes como a artrite reumatoide (AR), caracterizada pela deposição de complexos imunes na sinóvia, ocorre um intenso recrutamento e ativação local de neutrófilos, que agrava o quadro clínico da doença. Nesse contexto, a modulação das funções efetoras dos neutrófilos representa uma abordagem promissora para o tratamento adjuvante da AR. Estudos prévios do nosso grupo de pesquisa demonstraram que o derivado 3-fenilcumarínico 6,7-diidroxi-3-[3\',4\'-metilenodioxifenil]-cumarina (C13), sintetizado com base em metabólitos secundários de origem vegetal, modula negativamente o metabolismo oxidativo de neutrófilos de sangue periférico de indivíduos saudáveis, apresentando valores de CI50 - concentração necessária para inibir 50% da quimioluminescência dependente de luminol (QL1um) - próximos a 1 µM (na forma livre) e 3 µM (incorporada em lipossomas). Em continuidade a essas investigações, na primeira parte deste trabalho foi avaliado o efeito modulador in vitro da C13, livre e/ou lipossomal, sobre a produção de espécies reativas de oxigênio, a desgranulação de elastase, e a formação e liberação de NETs, de neutrófilos de sangue periférico de pacientes com AR, estimulados via receptores Fcγ e/ou receptores do complemento. Na faixa de 1-3 µM, a C13 livre e lipossomal inibiram aproximadamente 50% da QL1um, sem interferir nas demais funções efetoras dos neutrófilos avaliadas. Na concentração de 20 µM, a C13 livre e lipossomal inibiram cerca de 50% da produção de HOC1, 60% da liberação de elastase, e 40% da formação e liberação de NETs. Na segunda parte deste trabalho, foi avaliada a toxicidade da C13 sobre neutrófilos de sangue periférico de pacientes com AR e de indivíduos saudáveis, sob condições de cultura (18 h, 37ºC, 5% de CO2). Em ambos os grupos, a C13 não alterou significativamente a viabilidade dos neutrófilos, que se manteve em torno de 80%, conforme avaliado pelos ensaios de exclusão do corante Azul de Tripan e determinação da atividade da enzima lactato-desidrogenase. Entretanto, a C13 modulou os estágios de morte dos neutrófilos, reduzindo a porcentagem de células apoptóticas e aumentando a porcentagem de células necróticas, analisadas por citometria de fluxo. Em neutrófilos de ambos os grupos, tratados ou não com C13, a porcentagem de células hipodiploides (média = 15%) e o nível de expressão do receptor CD64 permaneceram constantes, independentemente do tempo de cultura, mas o nível de expressão do receptor CD62L decaiu em função do tempo de cultura, conforme avaliado por citometria de fluxo. A análise conjunta dos resultados obtidos indica que o derivado 3-fenilcumarínico C13 pode servir de protótipo para o desenvolvimento de novos fármacos com possível utilização no tratamento adjuvante de doenças com participação ativa dos neutrófilos, como a AR.