Análise da similaridade imunogênica de proteínas nativas e irradiadas de Leptomonas seymouri, Phytomonas serpens e Trypanosoma cruzi e sua capacidade de proteção contra a Doença de Chagas - Sartori, Giselle Pacifico (2025)
A doença de Chagas é uma doença tropical negligenciada e de grande importância para a Saúde Pública. A prevenção da doença depende somente do controle vetorial do triatomíneo, o que demonstra a importância na busca de candidatos vacinais para uma estratégia preventiva mais eficaz. Estudos prévios buscaram identificar imunógenos a partir de parasita inteiro de T. cruzi e suas subunidades ou protozoários da mesma família e obtiveram resultados promissores. Uma alternativa que pode contribuir para o aprimoramento dessas moléculas, é o uso da radiação ionizante uma vez que candidatos vacinais irradiados demonstraram melhora em suas propriedades imunogênicas. A partir disso, investigamos o efeito da radiação gama por Cobalto 60 nas proteínas de L. seymouri e P. serpens e T. cruzi, e a similaridade antigênica entre as moléculas dos parasitas. Após a imunização com essas proteínas, avaliamos a capacidade de induzir resposta imune e o tipo proteção em camundongos C57BI/6j. As modificações estruturais das proteínas após a radiação foram determinadas por EGPA SDS, que evidenciou uma modificação mínima no perfil das proteínas. A avaliação antigênica realizada por ELISA e Western Blot, demonstrou o reconhecimento de IgG humano anti-T. cruzi pelas proteínas de extrato antigênico (EA) total e excretado-secretado nativo e irradiado a 2, 3 e 4 kGy dos três parasitas avaliados. Notamos uma atenuação na reatividade de IgG frente as proteínas irradiadas, no entanto, os níveis de reconhecimento se mantiveram satisfatórios. Camundongos C57Bl/6J foram imunizados com 100 g de EA total nativo e irradiados de Leptomonas seymouri, Phytomonas serpens e Trypanosoma cruzi por via intraperitoneal e a partir do ELISA e Western Blot, observamos que todas as preparações induziram a produção de anticorpos IgG com menor produção para o EA total de Phytomonas serpens. Todas as imunizações apresentaram maturação de IgG acima de 40% com prevalência de IgG1. Na análise da resposta imune celular por citometria de fluxo, os esplenócitos de animais imunizados com EA total de Leptomonas seymouri apresentou maiores proporções de linfócitos CD4+ enquanto grupos imunizados com as proteínas de Phytomonas serpens e Trypanosoma cruzi demonstraram maior proporções de linfócitos T CD8+. Todas as preparações induziram ao aumento de IL- 2 e IL-17 pelas células esplênicas. Na análise da parasitemia após o desafio com tripomastigotas sanguíneos de Trypanosoma cruzi em camundongos imunizados com o EA total nativo e irradiado a 2 kGy, os grupos imunizados com as proteínas de Phytomonas serpens apresentaram menor número de parasitas circulantes. Na investigação da presença de DNA por PCR em Tempo Real nos órgãos dos camundongos desafiados, observamos menor detecção nos animais imunizados com EA total irradiado a 2 kGy de Phytomonas seymouri e Trypanosoma cruzi quando comparados ao grupo não imunizado. Nossos resultados apontam para a possibilidade do uso da radiação ionizante e moléculas antigênicas de parasitas não patogênicos compartilhadas com Trypanosoma cruzi para a busca de candidatos vacinais contra a doença de Chagas.