Mutações no éxon 8 (domínio PHD-1) do gene Aire afetam processos biológicos das células tímicas epiteliais medulares

• Ano de defesa: 2025
• Autor(a) principal: Azevedo, Yago Gonçalves de
• Tipo de documento: Dissertação
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: AIRE; Central tolerance; mTECs; PHD-1; Thymus; Timo; Tolerância central
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/17/17147/tde-26052025-092732/

A diversidade dos receptores de células T (TCRs) é gerada no timo, conferindo uma variedade de clones de células T que reconhecem uma ampla gama de patógenos. No entanto, clones de células T que expressam TCRs capazes de reconhecer autoantígenos são inevitavelmente gerados. No estroma tímico, as células epiteliais tímicas medulares (mTECs) expressam a proteína reguladora autoimune (AIRE), que é o principal controlador transcricional dos antígenos de tecidos periféricos (PTAs). A expressão de PTAs e sua apresentação pelas mTECs permitem a seleção negativa das células T autorreativas que reconhecem os PTAs. O domínio 1 de homeodomínio de planta (PHD-1), é um domínio da proteína AIRE que desempenha um papel crítico durante a interação de AIRE com a cromatina das mTECs. Ele reconhece preferencialmente regiões associadas a genes de PTAs silenciados, permitindo sua acessibilidade e regulação. Mutações no domínio PHD-1 de AIRE, encontradas em muitos pacientes com doenças autoimunes, mais especificamente na Síndrome Poliglandular Autoimune do tipo 1 (APS-1), demonstram o papel crucial desse domínio. Para avaliar os efeitos das mutações no domínio PHD-1 de AIRE na função das mTECs, clones de mTECs apresentando mutações no domínio PHD-1 de AIRE geradas por CRISPR-Cas9, foram avaliadas. Três clones com deleções distintas de pares de bases, que resultam na transcrição de uma proteína AIRE truncada ou uma mudança no quadro de leitura, foram selecionados para análise posterior. Nossos estudos in vitro mostram que essas mutações afetam o crescimento, adesão, e migração celular, além de interferir nas taxas de apoptose de mTECs e timócitos. Análises por citometria de fluxo, mostraram que as mutações no domínio PHD-1, interferem no padrão de expressão de moléculas importantes na indução da seleção negativa e da tolerância central, como o CD80 e o complexo principal de histocompatibilidade de classe II (MHC II), nas mTECs, e do CD28 e CTLA-4, nos timócitos. A própria expressão do gene e da proteína Aire se encontra desregulada quando avaliada por qPCR e citometria de fluxo, respectivamente, inferindo que mutações no domínio PHD-1 possam estar prejudicando o processo de estabelecimento da autotolerância.