Revisitando o gene HESX1 na busca de variantes sinônimas - Kertsz, Renata (2024)
INTRODUÇÃO: A complexidade do diagnóstico molecular do hipopituitarismo destaca se na diversidade fenotípica e na variabilidade genética associada à doença. A recente descoberta de variantes sinônimas no gene HESX1 representa um desafio adicional, enfatizando a necessidade de mais investigações. Neste estudo reexaminamos dados de sequenciamento, previamente realizados no laboratório de hormônios ( LIM 42 )), priorizando a detecção de variantes sinônimas para associação com o fenótipo dos pacientes, contribuindo para uma compreensão mais abrangente do hipopituitarismo e refinamento das estratégias diagnósticas. MATERIAIS E MÉTODOS: Dos 218 pacientes incluídos no estudo, 166 foram sequenciados em painel ou exoma, enquanto 51 foram submetidos ao sequenciamento Sanger. As sequências do painel ou exoma foram avaliadas na plataforma Franklin e as sequências Sanger fo ram verificadas manualmente. As variantes sinônimas identificadas foram confirmadas in silico , considerando MAF <1%, utilizando ferramentas como ABraOM, 1 000G e gnomAD. Para avaliar resultados em regiões de splicing foram utilizados SpliceAI e dbscSNV Ada, com estudo in vitro utilizando primers para amplificação e sequenciamento específico do gene HESX1 em cDNA. RESULTADOS: Evidenciaram se 3 variantes em 22 pacientes, 2 consideradas polimorfismos c.374A>G (p.N125S), c.385G>A (p.V129I). A variante c.460 3T>C, intrônica e na região de splicing , foi encontrada em heterozigosidade em apenas 1 paciente, que também era portador da variante c.374A>G (p.N125S). A avaliação in silico da variante c.460 3T>C indicou MAF <1%, mas com baixa probabilidade de impacto no splicing . O estudo in vitro não mostrou alterações no splicing do cDNA no pai, que é portador da variante, nem no paciente afetado. CONCLUSÃO: A reanálise das sequências do gene HESX1 não evidenciou variantes sinônimas, mas revelou variantes missense e intrônicas sem correlação genótipo fenótipo após validação in silico e experimental.