Caracterização enzimática de fungos ectomorrízicos e o envolvimento de enzimas celulolíticas na simbiose Eucalyptus urophylla - Pisolithus tinctorius - Estrada, Kátia Freitas Schwan (1997)
Para que ocorra a formação de uma simbiose ectomicorrízica funcional é necessário que exista um certo grau de compatibilidade entre os simbiontes envolvidos. Entretanto, observa-se que pode ocorrer uma variação no grau de compatibilidade para diferentes isolados de uma mesma espécie fúngica, resultando ou não em uma simbiose funcional. É possível que esta associação diferencial esteja relacionada a algum fator de reconhecimento do hospedeiro ou a diferenças bioquímicas e fisiológicas entre os fungos ectomicorrízicos. Desta forma, o trabalho realizado objetivou caracterizar enzimaticamente in vitro, isolados de Pisolithus tinctorius associados a Eucalyptus sp e a Pinus taeda, e de Rhizopogon sp obtido de Pinus sp, bem como verificar o possível envolvimento de enzimas celulolíticas produzidas por isolados compatível e incompatível de P. tinctorius na formação de associação ectomicorrízica com E. urophylla. Isolados de P. tinctorius (1603, 1604, 1605 - obtidos de Eucalyptus sp, E. grandis e E. saligna, respectivamente; 185 obtido de Pinus taeda) e Rhizopogon sp (obtido de Pinus sp), foram comparados quanto a: a) capacidade de utilização de fontes de carbono (glicose, frutose, sacarose, maltose, xilose, celobiose, celulose nativa (CN), carboximetilcelulose (CMC) e pectina) através do crescimento micelial em meio Melin-Norkrans modificado (MNM) sólido; b) produção de enzimas celulolíticas e de xilanase em meio MNM líquido acrescido de CMC, celulose microcristaiina (Avicei) ou celobiose; c) padrão eletroforético de α-esterase; d) enzimaticamente pelo sistema API-ZYM. Para verificar o envolvimento das celulases na associação ectomicorrízica, plântulas de E. urophylla, com 18 dias de idade, foram inoculadas com os isolados 1604 (compatível) ou 185 (incompatível), pela técnica do papel sanduíche. lsoenzimas de endo e exo β-1,4 glucanase e β-glicosidase produzidas in vitro e in vivo foram caracterizadas por cromatografia de filtração em gel. A micorrização foi acompanhada pela quantificação de ergosterol e por microscopia eletrônica de varredura (MEV). Os resultados obtidos mostraram que os isolados de P. tinctorius podem ser diferenciados quanto à utilização de fontes de carbono, e que o P. tinctorius isolado de Pinus e o Rhizopogon sp apresentam comportamento semelhante. P. tinctorius 1604 foi o único isolado incapaz de produzir exo β-1,4 glucanase na presença de Avicel, mas foi o que apresentou maior atividade de endo p-1,4 glucanase na presença de CMC. Com exceção de 1605, o start de glicose proporcionou um pequeno estímulo para indução enzimática na presença de CN. Todos os isolados mostraram atividade de β-glicosidade na presença de celobiose e atividade de xilanase na presença de CMC (com exceção de 1603). Também foi possível diferenciar os isolados pelo sistema API-ZYM e pelo padrão eletroforético de α-esterase. O número variado de isoenzimas de exo, endo e β-glicosidase mostrou a ocorrência de um sistema celulolítico diferenciado para os isolados fúngicos. A alta atividade celulolítica observada nas primeiras 12 h após a inoculação de P. tinctorius 1604 em E. urophylla sugere o envolvimento destas enzimas nos estágios iniciais da micorrização e no maior grau de compatibilidade com a planta hospedeira. No sistema incompatível, a atividade enzimática foi relativamente menor e detectada após 24 h da inoculação. Nesta interação não houve formação de manto micelial típico ao redor das raízes, e a micorrização avaliada pelo conteúdo de ergosterol e por MEV foi inferior à verificada na interação compatível.