T. solium e T. crassiceps: Caracterização dos antígenos e obtenção de anticorpos monoclonais - Espindola, Noeli Maria (1999)
O objetivo deste trabalho foi a obtenção de anticorpos monoclonais a partir da imunização de camundongos com antígenos de Taenia crassiceps (Tcra), que possibilitassem identificar antígenos referentes à Taenia solium (Tso) responsável pela infecção humana. Na caracterização por SDS-PAGE, o antígeno de Tso mostrou um padrão heterogêneo de composição de peptídeos, enquanto o de líquido vesicular de Tcra (LV-Tcra) se apresentou mais homogêneo com elevada concentração de peptídeos de peso molecular inferior a 20kD. Para o estudo da cinética de produção de anticorpos, foram utilizados camundongos BALB/c inoculados com antígeno LV-Tcra e total de Taenia solium (T-Tso), agrupados em 6 grupos de camundongos e 1 grupo controle, a saber: GI: salina; GII: 20µg de LV-Tcra; GIII e GV: 50µg de LV-Tcra; GIV: ~50µg de gel<30kD-Tcra; GVI: 50µg de eluato <30kD-Tcra e GVII: 50µg de T-Tso. Nos grupos de camundongos imunizados com Tcra foram detectados bons níveis de anticorpos IgM, IgG e IgA pelo ELISA-Tcra a partir do 15°dia após imunização, exceto o GIV que não apresentou anticorpos IgM. No blot-Tcra os anticorpos anti-Tcra mostraram reatividade para os peptídeos <20kD. As três classes de imunoglobulinas anti-Tcra dos GII e GIII apresentaram reatividade anti-Tso no teste de ELISA. As amostras do GIV não demonstraram anticorpos IgM e IgG e o GVI não apresentou IgG com reatividade anti-Tso. No blot-Tso, GII, GIII e GVI apresentaram anticorpos IgM que identificaram o peptídeo 30kD e o GIV apresentou anticorpos IgM que identificaram os peptídeos 60, 43, 30 e 12kD. Os anticorpos IgG identificaram o 12kD de Tso em todos os grupos inclusive nos GIV e GVI, cujas amostras haviam apresentado ELISA-Tso negativo. Os anticorpos IgA presentes nos animais dos GIII, GIV e GVI identificaram os peptídeos 65, 50, 30 e 12kD de Tso. Os animais do GVII imunizados com Tso apresentaram anticorpos IgM por ELISA-Tso a partir do 5° dia, IgG a partir do 15º dia e anticorpos IgA a partir do 39° dia após imunização. Os anticorpos IgM identificaram especificamente os peptídeos 60, 43, 30 e 12kD; IgG os peptídeos 95, 75, 67, 60, 45, 40-35, 25, 18 e 12kD e IgA os peptídeos 45, 40-35, 28-25 e 18Kd de Tso. Esses anticorpos reagiram cruzadamente com antígeno Tcra em menor intensidade quando comparado com a reatividade específica. Os peptídeos 72, 35, 30, 24 e 14kD de Tcra foram identificados por anticorpos IgM, 95, 70, 50, 30, 18 e 14kD por IgG e 70, 37, 35, 30, 18 e 14kD de Tcra por IgA. A fusão com células esplênicas de camundongos imunizados com 50µg de LV-Tcra e células de mieloma P3X63Ag8.653 foi realizada no 40° dia após a imunização. A triagem dos clones híbridos por ELISA detectou 36 clones secretores de lgM e 117 clones secretores de IgG, que identificaram o antígeno de Tcra e 40 clones secretores de IgM e 10 clones secretores de IgG que identificaram Tso. Após o teste de triagem, foram selecionados alguns clones para serem transferidos para placa de 24 cavidades e destes, 16 clones secretaram anticorpos com especificidade para LV-Tcra com reatividade com T-Tso. Dois clones 7 e 33 reconheceram os peptídeos 18 e 14-12kD no blot-Tcra.