Estudo de filmes finos automontados de proteínas por U.V. e microscopia de força atômica

• Ano de defesa: 1999
• Autor(a) principal: Herrmann Junior, Paulo Sergio de Paula
• Tipo de documento: Tese
• Tipo de acesso: Acesso aberto
• Idioma: por
• Instituição de defesa: Biblioteca Digitais de Teses e Dissertações da USP
• Palavras-chave em Português: atomic force microscopy; automontagem; filmes finos; microscopia de força atômica; proteínas; proteins; self-assembly; thin films
• Link de acesso: https://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/75/75131/tde-10032026-100803/

A microscopia de força atômica (MFA), nos modos contato e contato intermitente \"tapping\", foi usada neste trabalho como uma ferramenta para estudo da estrutura de proteínas depositadas em substrato sólido (mica). As proteínas analisadas foram a lisozima e glutamina sintetase. Com as imagens de MFA foi possível identificar essas proteínas sobre a mica como glóbulos. Com a glutamina sintetase foi possível obter imagens das moléculas isoladas onde observou-se um alargamento de aproximadamente 4 vezes, devido ao tamanho da sonda. Também analisou-se o processo de adsorção de lisozima em quartzo e mica com MFA e espectroscopia ultravioleta (UV) com a técnica de automontagem por fisisorção (AM). Com a espectroscopia de UV avaliou-se a cinética de formação do filme em diferentes condições de secagem (quente, frio e sem secagem), pH 4, 6,4 e 8, força iônica (sem sal, 10-2 e 10-4 M NaCl) e concentração 10-5 e 10-6 M. Os filmes adsorvidos em quartzo e mica, a partir de soluções 10-5 e 10-6 M, sem sal e pH 6,4, também foram analisados com MFA. Com MFA observou-se que há uma significativa variabilidade espacial nos filmes (agregados). Analisou-se, com MFA, a influência do processo de secagem, lavagem da lâmina, filtração e centrifugação da solução de proteínas na qualidade do filme. Demonstrou-se que parte dos agregados vem do processo de secagem e da lavagem insuficiente das lâminas, mas que a maioria vem diretamente da solução, uma vez que são reduzidos com filtração, centrifugação e diluição da solução de proteínas. Foi também observado com MFA que há no filme regiões ordenadas e desordenadas, que não são previstas pelo modelo de adsorção sequencial randômica (RSA). Por isso propôs-se um novo modelo intermediário entre o RSA e o de organização total (cristal). No modelo proposto, após a adsorção da primeira molécula, aleatoriamente, esta facilita a adsorção das proteínas seguintes. A proteína inicial serve como âncora ou semente para as proteínas, como na formação de cristais. As regiões de crescimento, ao se encontrarem, geram uma região heterogênea.