Epigenética e epilepsia: análise da metilação do DNA da KvDMR1 e do gene Pgk1 em modelo animal - Silva, José Hugo do Rêgo (2018)
A linhagem Wistar Audiogenic Rat (WAR) é uma variante endogâmica desenvolvida por seleção genética de um progenitor Wistar, sendo baseada no padrão de resposta comportamental epiléptica sensível à estimulação sonora. Várias alterações fisiológicas e moleculares vêm sendo descritas em WARs, mas pouco ainda se sabe quanto às alterações genéticas e epigenéticas relacionadas à suscetibilidade, estabelecimento ou consequências dessas crises. Este estudo teve como objetivo comparar o padrão de metilação do DNA da KvDMR1, localizada numa região controladora de imprinting (ICR1) e do gene ligado ao X Pgk1 em amostras do encéfalo, placenta, coração e fígado de filhotes das linhagens WAR e Wistar. Foram utilizadas amostras de dez filhotes recém-nascidos da linhagem Wistar e nove da linhagem Wistar Audiogenic Rats (WAR). A análise quantitativa de metilação do DNA da KvDMR1 e do gene Pgk1 foi realizada pelo Método de Digestão Enzimática Sensível à Metilação Associada à PCR em Tempo Real com as enzimas HpaII e MspI, para a KvDMR1, e HhaI, para o gene Pgk1. Os resultados obtidos para a KvDMR1 mostraram que apenas a placenta apresentou diferença significativa (p = 0,0137) entre as linhagens Wistar e WAR. Amostras de tecido do coração dos animais da linhagem WAR mostraram-se hipermetiladas para a KvDMR1, com diferença estatística significativa em relação aos outros tecidos da linhagem (p < 0,05). Nenhum tecido mostrou diferença estatística significativa entre as duas linhagens para a metilação do gene Pgk1. O padrão de metilação do gene Pgk1 nos animais da linhagem WAR mostrou diferença estatística significativa entre machos e fêmeas para todos os tecidos (p > 0,05), enquanto nos Wistar a diferença entre os dois sexos foi observada apenas para o encéfalo (p = 0,0030). O padrão de metilação da KvDMR1 na placenta dos animais WAR e Wistar não foram congruentes com a curva de crescimento diferenciada em estudo publicado com esses animais. O coração dos animais WAR mostrou maiores porcentagens de metilação para a KvDMR1. Esses dados apontam associação com cardiopatias já relatadas nessa linhagem e em humanos, visto que genes regulados por essa região perfazem mais da metade dos casos da Síndrome do QT Longo humana. O gene Pgk1 mostrou uma maior porcentagem de metilação para o encéfalo em relação à placenta em ambas as linhagens quando analisados independente do sexo. Esses dados são confluentes com dados publicados para a expressão desse gene em animais WAR e Wistar. Foi verificado também um dimorfismo sexual no padrão de metilação do encéfalo nesses animais. Esses dados vão de acordo com estudos que indicam implicações na utilização desse gene como housekeeping na análise de transcritos por qPCR. Os achados do presente estudo são inéditos para a KvDMR1 e reforçam alguns dados na literatura para o gene Pgk1, contribuindo para o entendimento dos mecanismos epigenéticos em um modelo para epilepsia.