Bradicinina induz produção de fator de necrose tumoral-α membranar e solúvel por macrófagos peritoneais de camundongos Balb/c - Alberto, Daniella Pereira Crosara (1996)
O envolvimento de citocinas, particularmente TNF-α, na hiperalgesia foi demonstrado por nosso laboratório através do modelo de Randall-Selitto modificado, sugerindo que a BK exerce seu efeito hiperalgésico através da liberação desta citocina (Ferreira, 1993). O objetivo do presente trabalho é demonstrar que a BK induz a produção de TNF membranar e solúvel por macrófagos peritoneais de camundongos. Para isto macrófagos foram coletados do peritôneo de camundongos pré-tratados com adjuvante completo de Freund e estimulados in vitro com BK. As membranas, bem como sobrenadante destas células foram submetidos ao ensaio de citotoxicidade sobre células WEHI 164 para determinação da presença de TNF nas amostras. Demonstrou-se que membranas e sobrenadante de macrófagos peritoneais obtidos de camundongos pré-tratados com adjuvante completo de Freund exercem atividade citotóxica em células WEHI 164. Um anticorpo anti-TNF-α bloqueou a atividade das membranas e do sobrenadante de macrófagos incubados com BK em 80 e 60% respectivamente, demonstrando que esta atividade citotóxica se deve predominantemente ao TNF em suas formas membranar e solúvel. Curiosamente, macrófagos provenientes de animais normais incubados com BK não produziram TNF membranar ou solúvel. Por outro lado, o LPS mais IFNγ induziram a produção de TNF de ambos os tipos por macrófagos provenientes de animais normais e daqueles tratados com adjuvante completo de Freund. Este fato sugere que a BK necessita de um segundo sinal, que neste estudo e o adjuvante completo de Freund, que irá facilitar o efeito da BK na indução da produção de TNF membranar e solúvel por macrófagos. Para elucidação do receptor de BK envolvido na produção de TNF membranar e solúvel, agonista e antagonista B1 e B2 de BK foram utilizados. A expressão do TNF membranar induzida pela BK foi bloqueada pelo antagonista B2, HOE 140, enquanto que este antagonista não impediu a produção de TNF solúvel. Assim o receptor B2 da BK pode estar envolvido na expressão de TNF membranar em macrófagos estimulados com BK, mas não medeia a produção de TNF solúvel quando estudados neste modelo. Diante destes resultados sugerimos que o receptor B2 pode estar mediando a resposta local induzida pela BK. Quando analisamos o envolvimento do receptor B1 na produção de TNF membranar e solúvel, observamos que antagonista B1, des-Arg9-[Leu8]-bradicinina, não bloqueou a produção de TNF membranar e solúvel, assim como o agonista B1, des-Arg9-BK não induziu a produção de ambos os tipo de TNF, sugerindo que o receptor B1 não participa neste fenômeno. Finalmente o presente trabalho não demonstrou qual o receptor envolvido na liberação de TNF solúvel por macrófagos incubados com BL, a este resultado podemos inferir a participação de um outro tipo de receptor da BK, como por exemplo B2-A ou B2-b, ou ainda B3, B4 ou B5. O conjunto dos resultados apresentados confirmam a proposição feita anteriormente por Ferreira et al. (1993) de que BK evoca hiperalgesia, indiretamente, através da produção de TNF solúvel e membranar.