Triagem de diuréticos por cromatografia líquida de alta eficiência com finalidade de controle da dopagem no esporte - Moreira, Vanessa (2002)
Apesar de serem considerados fármacos ergolíticos, os diuréticos foram incluídos na lista de substâncias proibidas, em 1986, elaborada pelo lnternational Comitte Olympic (IOC), por serem utilizados como agentes mascarantes e para uma rápida redução de peso em modalidades esportivas, como halterofilismo, luta greco-romana, judô, karatê e boxe. Desde então, são requeridos procedimentos de triagem para detectar a presença desses compostos na urina. Um simples e adequado método de triagem por meio da técnica de cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), acoplado ao detector de arranjo de diodos (DAD), foi otimizado e validado, com finalidade de controle de dopagem dos seguintes diuréticos: acetazolamida, amilorida, bumetanida, clopamida, clortalidona, espironolactona, furosemida, hidroclorotiazida, piretanida e triantereno. O método envolveu extrações simultâneas de 2 ml de urina com acetato de etila em pH diferentes. A extração ácida foi feita com a adição de tampão sólido KH2PO4 e NaH2PO4 (99:1 p/p), pH 5,0 a 5,5, e para remoção dos interferentes urinários, utilizou-se solução de acetato de chumbo a 5%. Na extração básica, a alcalinização da urina foi feita com NaHCO3 e K2CO3 (3:2 p/p), pH 9,0 a 9,5. A fase móvel consistiu de acetonitrila e tampão acetato de amônio 0,05 M (pH 3,0), com gradiente de eluição e a detecção foi feita em comprimentos de onda de 260, 270 e 360 nm. O método desenvolvido apresentou detecção de até 0,09 µg/mL, com valores de recuperação, entre 55,26%. a 94,82%. Também mostrou-se preciso, tanto em condições de intra como interensaios. Além disso, foi testado a especificidade para quatro diuréticos, dos dez selecionados: clortalidona, espironolactona, furosemida e hidroclorotiazida, na presença de outros fármacos. Os dez diuréticos mantiveram-se estáveis por 24 horas, à 22,5 a 24ºC e após armazenamento por quase dois meses, em freezer à -20ºC. Foram analisadas dezesseis amostras de urina de atletas para a aplicação do método otimizado e validado, as quais foram detectadas cinco amostras positivas, na fase de triagem, para: clortalidona, furosemida e hidroclorotiazida.