Análise da regulação do splicing de microRNAs do cluster miR-17-92. - Silva, Guilherme Henrique Gatti da (2021)
O controle da expressão gênica é um processo essencial em eucariotos. Após a transcrição, ocorrem eventos dependentes de diferentes proteínas e RNAs, os quais, associados, formam complexos ribonucleoproteicos que auxiliam na maturação e direcionamento dos mRNAs. Os genes são compostos por regiões denominadas exons, presentes no RNA maduro, e por sequências intermediárias denominadas introns. Estas sequências são transcritas em precursores de RNA, prémRNAs, que devem sofrer splicing antes de serem exportados para o citoplasma para serem traduzidos e executarem sua função celular. O processo de splicing de pré-mRNAs é essencial em eucariotos e alterações nos sítios de splicing ou em componentes do complexo spliceossomo estão associadas ao desenvolvimento de diversas doenças. No genoma humano, aproximadamente 70% dos microRNAs (miRNAs) são transcritos a partir de introns e devem sofrer splicing. O cluster de miRNAs miR-17-92, composto por 7 miRNAs diferentes, está localizado no intron do gene MIR17HG no cromossomo 13. Alterações na sua expressão já foram relacionadas aos cânceres de pulmão, ovário, tireóide, linfomas e leucemias. É possível que a regulação do splicing dos miRNAs deste cluster esteja relacionada ao desenvolvimento destes diferentes tipos de câncer. Sendo assim, o principal objetivo desta tese foi investigar o papel das proteínas de ligação ao RNA (RBPs), especialmente HuR e proteínas da classe das hnRNP na regulação da biogênese deste cluster. Para isso, induzimos alterações na expressão destas proteínas e verificamos a expressão dos miRNAs desse cluster. Além disso, verificamos se os miRNAs induzidos por ELAVL1/HuR são funcionais, a partir de um sistema repórter do splicing. Com o sistema repórter foi possível verificar a eficiência deste processo e a maturação dos miRNAs do cluster. Verificamos também que a indução da expressão destes miRNAs, especialmente miR-19a e miR-19b, desencadeiam aumento na proliferação, migração e invasão celulares em células de tumor de tireóide. Foi também construída uma biblioteca de miRNAs em células nocaute para proteínas de ligação ao RNA, a fim de refinar a compreensão sobre a regulação da expressão destas moléculas. Nossos dados comprovam que o miR-34 possui expressão alterada na maioria das células analisadas, e o miR-221/222, mostrou possuir uma afinidade maior a proteínas da família das hnRNPs e TIA/TIAL1. Em conjunto, nossos dados mostram que proteínas de ligação a RNA, como a ELAVL1/HuR e hnRNP C, podem associar-se a miRNAs provenientes de introns, estimular sua biogênese e maturação, e levar a modificações celulares associadas com o câncer.